哈喽,有液相实验经验的小伙伴应该都清楚,在考察液相色谱分离条件时,最重要的参数就是洗脱条件。其中洗脱条件又分为等度洗脱和梯度洗脱。下面小编就简单带大家来看下这两种洗脱方式的优点和缺点,以及他们的适用范围。
01、等度洗脱
是指在样品组分的分析周期中,流动相的组成比例和流速恒定不变的洗脱方式。
优点
1、对于等度洗脱而言,由于方法运行时,流动相的比例不发生变化,所以它对仪器的要求不高,只需要一个单元泵就可以运行方法。
2、由于等度洗脱条件单一,所以比较容易用来摸索方法设置,例如改变流动相比例,改变柱温等条件。
3、由于等度洗脱每次运行时的流动相比例相同,所以相同方法运行多个样品时,样品之间不需要设置平衡时间来让系统恢复到所需的流动相比例。
缺点
1、越往后出峰的组分色谱峰越宽。
2、并且大多数等度洗脱的方法分析时间较长。
02、梯度洗脱
是指在同一个分析周期中,按一定程序不断改变流动相的浓度配比的洗脱方式。
优点
1、梯度洗脱能够规避掉等度洗脱的问题,例如梯度洗脱的样品峰,无论先出峰还是后出峰的组分,它们的峰形基本都能保证尖锐对称。
2、由于梯度洗脱通常设置的流动相比例是让洗脱强度越来越强,这样能保证在较短的时间内,让样品中强保留组分也能被洗脱出来。
缺点
1、如果在运用梯度洗脱时,流动相比例变化过快,可能产生鬼峰影响检测。
2、梯度洗脱对仪器的配置要求较高,通常需要配置四元泵或者二元泵。
3、梯度洗脱每次运行样品之间,需要设置一定的平衡时间,来让系统中流动相的比例到达初始流动相比例。
4、梯度洗脱的方法设置复杂,例如影响分离的:有初始流动相比例、流动相的梯度变化、结束流动相比例、柱温箱温度等,所以方法的开发和优化会较为复杂。
03、适用范围
用梯度洗脱还是等度洗脱,主要看杂质与杂质、主峰、溶剂峰的分离的情况。同一物质有梯度洗脱和等度洗脱两种条件时,梯度洗脱的认可度较高。下面就是更适合梯度洗脱的适用情况。
1、多组分样品的极性范围大,用等度无法全部洗脱的样品。
第一种情况:杂质和主成分极性相差很大,长时间杂质未能洗脱出来,就必须考虑用梯度。
第二种情况:杂质极性比主峰的大,等度时要想主峰时间合适杂质全堆在前边,杂质分开主峰又出峰太晚,这种情况也得考虑梯度洗脱。
2、大分子量样品(肽、蛋白质、合成聚合物等)一般采用梯度洗脱分离会更好,尤其是反相条件。这类样品,往往对有机相的量特别敏感,有机相的微小变化就会使样品的保留时间发生很大的变化,导致用等度条件检测时,无法使保留时间控制在一个稳定合适的范围内。
3、改善峰型。
4、目标峰出峰后,短时间内提高有机相比例,洗脱强保留干扰杂质。
5、用等度洗脱无法达到分离的情况。有些物质,特别是结构相近的物质,等度条件下无法达到分离,而采用梯度模式,因组分在有机相变化的选择性差异,可以达到分离,这种情况下就需要采用梯度条件进行测试。
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