前沿平缓,后沿陡峭的不对称色谱峰称前沿峰。当色谱峰的对称因子在0.95~1.05为正常峰;小于0.95为前沿峰;大于1.05为拖尾峰。一般情况下,0.9~1.2的色谱峰均可被接受。
在日常的液相色谱分析过程中,前沿峰也是我们经常遇到的色谱图问题。那今天我们就来学习下,前沿峰的缘由以及该如何应对。
01前沿峰的影响
影响峰高的计算
峰面积相同情况下,由于峰前沿,它们的峰高会相差很多。当我们使用峰高来计算样品结果时就产生影响,尤其是计算zui低检出xian时会比较明显。
影响峰面积的计算
当计算峰面积时,峰的起点和终点一般通过色谱峰的斜率来确定。色谱峰前沿,它的前部基线越平缓起点就越难确认,导致峰面积定量不准。
影响对某些痕量组分的确认
当前面的峰分离度不是很好时,样品峰就会容易被隐藏在后面峰的前沿处从而无法计算。
02前沿峰原因分析及解决方案
柱过载
每一根色谱柱都有其最大样品承载量,当样品量过多时会出现超载现象,包括质量过载和体积过载。我们可通过降低样品量或者样品浓度来看峰形是否有所改善。也可增加柱直径,采用较高容量的固定相来解决。
样品溶剂选择不恰当
当样品溶剂的洗脱能力大大强于流动相时会出现前沿峰。具体就是说,样品在色谱柱中均匀的往前移,我们通常会得到呈正态分布的峰。当样品溶液进样后到达色谱柱的时间比较短,在未被流动相充分稀释时,由于洗脱能力比较强的样品溶剂存在,使部分样品被洗脱的速度加快,快速通过色谱柱,最终导致峰前延。例如,在反相色谱中用乙腈做样品溶剂,如果流动相的洗脱力较弱时就会出现前沿峰。我们可以选择流动相或者接近流动相的比例的试剂作为样品溶剂。
色谱柱损坏
色谱柱在长时间使用之后就会导致硅胶填料的溶解,柱床崩解,从而柱效降低导致峰前沿。如果排查出是色谱柱损坏,建议直接更换色谱柱。
峰干扰
两个化合物共洗脱,即在大峰前有小峰出现,色谱峰没有分开。可通过增加样品净化程序,减少干扰。也可调整流动相提高分离度。
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