近日,有媒体报出新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。据了解,高剂量的双氰胺对人体是有毒的,然而,相关国际标准尚未对双氰胺在食品中的限量做出规定,所以,DCD事件一时间引起了全世界的高度关注和担忧。
针对此次奶制品的突发事件,月旭科技采用公司新一代的Welchrom
® QuChERS-双氰胺净化管(500mg/15mL,货号:00539-20020)和Ultimate
® Polar-RP液相色谱柱,建立了奶粉中双氰胺的QuEChERS快速前处理方法和LC-UV检测方法,为广大客户提供最有力的技术支持。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂与材料
高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。
双氰胺标准品(CAS:461-58-5;FW=84.08),新一代Welchrom
® QuChERS-双氰胺净化管,Ultimate
® Polar-RP液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,实验用水为超纯水。
表1 双氰胺的信息
名称 |
结构式 |
分子量 |
CAS |
双氰胺 |
|
84.08 |
461-58-5 |
1.2 实验步骤
称取1g试样于50mL具塞离心管中,加2mL水,涡旋30s,加2ml乙腈涡旋30s。再往现有的提取液中加2mL乙腈,重复上述提取步骤。再将该提取步骤重复2次,得到共计约10mL的提取液。以4000r/min离心5min,将全部上清液加入新一代Welchrom
® QuChER管中(500mg/15mL),将净化管上下晃动30s,然后涡旋30s后,10000r/min离心5min,取全部上清液(约10ml)于玻璃试管中,50℃下氮气吹干,加入1ml乙腈复溶,过0.22μm微孔滤膜,待测。
注:1.做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂,防止加标瞬间发生蛋白沉淀;
2.乙腈提取分4次,为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快,影响提取效果。
1.3 实验条件
1.3.1高效液相色谱法(HPLC法):
色谱柱:月旭Ultimate
® Polar-RP,4.6*250mm ,5μm(货号:00215-31043 );
流动相: 10mmol/L乙酸铵(乙酸调节pH=4.0);
波长:220nm;
进样量:10µl;
柱温:30℃;
流速:0.8mL/min。
1.空白溶剂
2.双氰胺:0.1076μg/ml
3、空白样品图:
4、奶粉中添加0.5ug/ml色谱图: