工业企业微生物测定知识

2009-06-10 14:10  下载量:26

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1. 水样的准备: 1.1 检验之前,在每个培养皿上表明水样号码、稀释度、日期和其它任何应有的说明。每个稀释度至少准备两个重复的培养皿。 1.2 将水样彻底的搅动均匀,方法是上下(左右)摇动25次。摇动的幅度大约0.3米,所花时间为7秒钟。 2. 稀释水和培养基 2.1稀释水:将8.5克氯化钠在1升蒸馏水中。分装的量以蒸压灭菌15分钟之后能维持99±2.0毫升或9±0.2毫升为度。 2.2缓冲水:配置磷酸盐缓冲储备液,是将34.0克的磷酸二氢家钾溶液在500毫升的蒸馏水中,用1摩尔/升的氢氧化钠溶液调节到7.2±0.5,然后再加蒸馏水到1升。把1.25毫升的磷酸盐缓冲储备液和50毫升的氯化镁溶液(38克氯化镁/升蒸馏水)加蒸馏水到1升,分装到瓶子或试管里,分装的量以蒸馏水之后能维持99±2.0毫升或9±0.2毫升为度。 2.3在任何稀释水中制备细菌悬浮液后,不要在室温下待留30分钟以上,因为细菌的死亡或繁殖都可能发生。 2.4营养琼脂培养基 蛋白胨 10.0克 牛肉膏 3.0克 氯化钠 5.0克 琼脂 15.0克 蒸馏水 1升 以蒸压(121℃)灭菌15分钟,PH在7.4到7.6之间。注配置后的澄清度有无沉淀、PH变化、细菌的发育,对异常者不能使用 3. 水样的稀释和量取 3.1选择稀释度:以期在平皿上的菌落总数介于30和300之间 3.2水样的稀释:用1毫升灭菌吸管吸取水样1毫升注入到99毫升的空白稀释水中。当吸取水样时,不要把吸管尖插入液面之下2.5厘米深。放出水样时,吸管尖不要触及稀释水。振摇稀释瓶混合均匀,作成1:100的均匀稀释水样 3.3另取一支1毫升灭菌吸管,吸取1:100的均匀稀释水样,做100倍递增稀释到1:1000的均匀稀释水样 3.4稀释水样的量取 每从一个不同的稀释水样做转移、接种时,要各用一支不同的无菌细管。当放出一定量的水样时,握住吸管尖端与培养皿底成450的角度相接,皿盖要适当提起,使吸管恰足以插入,容许2-4秒的时间,让液面从吸管上的1好升的刻度线排出到吸管尖。 将吸取的1毫升水样转移到无菌培养皿中后,加入融化的培养基。 4. 平皿的操作 4.1融化培养基:把盛放无菌的固态琼脂培养基的容器放在沸水中,使培养基融化。若发现融化的培养基中含有沉淀物就应该弃去不用。不可对灌皿用的培养基再行蒸压灭菌。 融化的培养基可置于45±1℃水浴中保温,到使用之前才取出。 4.2灌皿:从第一个水样的稀释开始到对最后一个平皿施以灌皿,时间不得超过20分钟(以10分钟为最好),稀释水样转到平皿后,应及时将凉至45±1℃营养琼脂培养基灌入平皿至少10-12毫升,灌皿之后将融化的培养基和其中定量的试验水样彻底混合。方法是握住平皿,先往一个方向画圆,再朝相反方向回转,不要使混合液溅到培养皿的边缘,让平皿培养基于水平位置静止10分钟左右固化。固化之后,倒置平皿,在培养箱中进行培养。 4.3无菌控制:将培养基灌入加有1毫升稀释水的无菌平皿内作空白对照,检查培养基和稀释水的无菌性。 5. 培养 5.1在培养箱中叠放平皿,不可使平皿过于拥挤 5.2一般水样的标准平皿记数应在35±0.5℃之下培养48±3小时 6. 记数和记录 6.1培养之后,取出平皿,立即数出皿中所有的菌落数。(如果记数暂缓施行,平皿存放在5—10℃且不超过24小时) 6.2在决定标准平皿记数的时候,应选择具有30-300个菌落的平皿 6.3如果平皿中的菌落数远超过300,不要在记录中写成“多不克记” 6.4对平皿上有蔓延菌落生长,应写上。

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