重组人体表皮(RhE)可以部分替代动物实验、甚至可能比动物实验更能作为人体情况预测参考的系统,因此在刺激性和腐蚀性化学品的危害识别和监管领域(如OECD TG 431试验)具有重要的价值。制药和化妆品等领域也始终在尝试借助人造人体组织开展耐受性、毒理学和刺激性研究,从而尽可能地减少开展动物实验。
对RhE模型的横截面进行HE染色,可以看到清晰的组织结构。
图1. 对在BRAND Insert 2in1嵌套培养小室(左)与某品牌小室(右)中培养的RhE模型进行HE染色,人源性角质形成细胞发育成了具有多层角质的结构。
在570nm波长下检测出给定的时间里暴露于化学品的培养物平均存活率大于50%,显示RhE模型具有明显的屏障功能。
图2. 用MTT法检测暴露于PBS和Triton X-100的RhE模型活性。
阴性对照测试比对结果显示,在BRAND Insert 2in1嵌套培养小室与某品牌小室中培养的RhE模型存活率相近,并且由BRAND Insert 2in1嵌套培养小室建立的RhE模型存活率结果的数据标准偏差更小。
表1. MTT法检测暴露于PBS的RhE模型活性
为了测试RhE模型是否可用于鉴别化学物质的潜在腐蚀性,将建立的RhE模型暴露在一组化学物质中3分钟或60分钟后,对其进行MTT检测,并将检测结果进行归一化处理。结果显示,暴露后,RhE模型在非腐蚀性物质,如4-(甲硫基)-苯甲醛中可以保持大于50%的活性,而在预评估为腐蚀性物质的甲酸、乳酸中以及阳性对照组实验中的活性显著降低。
图3. 不同化学物质的腐蚀性比较(NC,阴性对照。PC,阳性对照)
综上所述,BRAND Insert 2in1嵌套培养小室建立的RhE模型,具有良好的形态,清晰的组织结构,完整的屏障功能,可用于体外化学腐蚀性分析,并能带来更稳定的检测数据。
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独特的偏心设计让加液、换液一步到位,无需移动小室,减少对细胞不必要的干扰,降低污染风险。
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