方案摘要
方案下载| 应用领域 | 食品/农产品 |
| 检测样本 | |
| 检测项目 | |
| 参考标准 | GB 50095 |
消化完成后，在凯氏定氮仪中加入浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借助水蒸汽蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，然后用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。
用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时，则可用此法测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时，其中的碳、氢两元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。此过程通常称为“消化”。但是，这个反应进行得比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂，以促进反应的进行。消化完成后，在凯氏定氮仪中加入浓碱，可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借助水蒸汽蒸馏法，将产生的氨蒸馏到一定量、一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨与溶液中氢离子结合，使溶液中的氢离子浓度降低，指示剂颜色改变，然后用标准无机盐酸滴定，直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止。根据所用标准盐酸的量可计算出待测物中的总氮量。蛋白质的含氮量为16%，即1克蛋白质中的氮相当于6.25克蛋白质，用凯氏定氮法测出的含氮量乘以6.25,即得样品中蛋白质的含量。
1 实验材料 1.1 器材 上海沛欧SKD-100定氮仪 、消化炉SKD-08S2 1.2 试剂2 实验步骤
实验材料
器材
上海沛欧凯氏定氮仪 1套（SKD-08S2消化炉可以任意选择消化孔数，而不影响热量散失）；
300ml凯氏烧瓶 4个；
移液管；锥形瓶；
试管；
小玻璃珠
试剂
98%浓硫酸分析纯；
35％氢氧化钠溶液；
2％硼酸溶液；
标准盐酸溶液（0.01mol／L）。
粉末硫酸钾—硫酸铜混合物 ：K2SO4与CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。
混合指示剂（田氏指示剂）：由50ml 0.1％甲烯蓝乙醇溶液与200ml 0.1％甲基红乙醇溶液混合配成，贮于棕色瓶中备用。
样品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作为样品。
实验步骤
安装凯氏定氮仪。
消化：取4个300ml凯氏烧瓶并标号,各加1颗玻璃珠，在1号及2号瓶中各加样品1ml，催化剂（K2SO4- CuSO4·5H2O）200 mg，浓硫酸5 ml。注意加样品时应直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶颈上。在3号及4号瓶中各加1 ml蒸馏水和与1、2号瓶相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照。在通风橱内进行消化。在消化开始时应控制火力，不要使液体冲到瓶颈。待硫酸开始分解并放出SO2白烟后，适当加强火力，继续消化，直至消化液呈透明淡绿色为止。撤掉火力，冷却至室温。 （上海沛欧SKD-08S2消化炉可编程设定消化炉消化样品的升温曲线）
蒸馏：
蒸馏器的洗涤：用水洗涤干净微量凯氏定氮仪，在蒸汽发生器中加入用几滴硫酸酸化的蒸馏水和几滴甲基红指示剂，用这样的水蒸气洗涤凯氏定氮仪。约15分钟后，在冷凝器下端倾斜放好装有硼酸-指示剂的锥形瓶，继续蒸汽洗涤2分钟，观察锥形瓶内的溶液是否变色，如不变色则证明蒸馏装置内部已洗涤干净。移走锥形瓶，停止加热，打开夹子。 （沛欧skd-100可以设定清洗程序）
蒸馏：设定取30％的氢氧化钠溶液10ml，向玻璃杯中加入蒸馏水约5ml稀释液，设定蒸馏时间5分钟，开始蒸馏。氨气进入锥形瓶，瓶中的酸溶液由紫色变成绿色。再继续下一个蒸馏操作。待样品和对照均蒸馏完毕后，同时进行滴定。
滴定：用0.01mol／L的标准盐酸溶液滴定各锥形瓶中收集的氨量，硼酸指示剂溶液由绿色变淡紫色为滴定终点。
结果计算：
其中：
A为滴定样品用去的盐酸溶液平均ml数；
B为滴定对照液用去的盐酸溶液平均ml数；
C为所取样品溶液的ml数。
文献贡献者
凯氏定氮仪测定面膜原液的蛋白含量
检测方案凯氏定氮仪测定土壤的氮含量
凯氏定氮仪测定蛋黄卵磷脂的氮含量
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