我们在动物免疫实验中经常会用到一类试剂-免疫佐剂。在实验中用的最多的就是弗氏佐剂,其最大的特点是具有较强的免疫增强效应,在抗体制备和炎症造模等方面有着广泛应用。
一、增强动物对抗原的应答/缩短免疫周期;
二、减少注射抗原剂量和注射次数;
三、有效安全无毒的诱导可溶性抗原长期记忆性免疫应答。
MP提供高品质稳定的进口佐剂,彻底解决上述三点困难,满足日益增加的免疫佐剂需求。
弗氏佐剂(Freund's Adjuvant)包括完全佐剂(FCA/CFA)和不完全佐剂(FIA/IFA/FICA)。不完全佐剂由油剂(石蜡油或植物油)与乳化剂相混合而成,当其再与抗原混合,即成油包水乳剂,可用于免疫注射。在不完全佐剂中加入分枝杆菌(如死卡苗),即成为弗氏完全佐剂。
【弗氏佐剂与抗体制备】
抗体制备过程中,对于可溶性抗原免疫原性弱,最常使用弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂。要求抗原和佐剂等体积混合在一起,研磨成油包水的乳糜状,免疫动物后获得β淋巴细胞或抗血清。初次免疫采用弗氏完全佐剂,初次免疫3-4周后会进行加强免疫,采用弗氏不完全佐剂,通常需要加强免疫2-3次才能获得满意的抗体滴度,每次间隔3-4周。要做抗体制备的小伙伴们记得弗氏不完佐剂多买一些哦!
用双蒸馏水将CH3COO稀释成0.1mol/L,0.2 um微孔膜过滤除菌,4℃保存过夜。用2.5 mL CH3COO稀释10 mg异源性Ⅱ型胶原(一种与免疫系统隔绝的蛋白质,大量存在于关节软骨中),制成终质量分数为4 mg/mL的溶液。
锡箔纸保存避光,4℃环境下溶解过夜,再将Ⅱ型胶原与CFA(弗氏完全佐剂)两者等体积混合、乳化,制成CⅡ乳剂(即每毫升含1 mg CⅡ和1 mg卡介苗)将该乳剂于小鼠的尾根部皮内注射0.1ml致炎,第21日腹腔注射乳剂0.1ml作为激发注射。
造模优点:模型较为成熟,与人类病理过程有一定相似性。
造模缺点:缺乏统一操作标准,动物,注射剂量和部位等容易影响成膜率。
#2 佐剂性关节炎模型(AA)
20世纪50年代由细菌学家Freund创立佐剂性关节炎,又称是弗氏佐剂关节炎,是免疫性关节炎动物模型的基本方法。
造模方法:
多采用大鼠,足跖皮下注射法:将液体石蜡高压灭菌,BCG(卡介苗) 80℃灭活1h,把BCG加入液体石蜡配成10 g/L的乳剂,充分碾磨、混匀,即得CFA,于大鼠左后足跖皮内注射CFA(弗氏完全佐剂)0.1 mL致炎。
造模优点:模型较为成熟,与人类病理过程有一定相似性。
造模缺点:缺乏统一操作标准,动物,注射剂量和部位等容易影响成膜率。
#3 卵蛋白诱导性关节炎模型(OVA)
卵清蛋白诱导的关节炎模型首次出现于1962年,卵蛋白诱导的关节炎模型可用于风湿性关节炎的发病机制、自身免疫病理调节、细胞因子作用的研究和类风湿性关节炎药物的药效学研究。
造模方法:
鸡卵蛋白溶液(20 mg/mL)、卡介苗和弗氏不完全佐剂(三者比例1 mL:2 mL:1 mL)混合在1500 r/min匀浆器下制成混合乳剂。将混合乳剂1 mL在兔肩胛间区分5个部位皮下注射,2周及4周分别加强免疫1次,然后双膝关节腔内各注射5 mg卵蛋白。
造模优点:模型成功率高,操作简单、重复率高。
造模缺点:兔源化抗体稀少,后期研究困难。
Q:那么,选购佐剂时需要考虑哪些因素呢?
1.能否改变抗原的物理性状,使抗原物质缓慢地释放;
2.能够激活免疫细胞,增强免疫反应;
3.无毒性或副作用低;
4.用量根据所选抗原而定,通常为与抗原体积比例1:1,佐剂的应用可以帮助减少抗原用量;
5.佐剂与抗原的混合形成稳定结构的难易程度,弗氏佐剂与抗原混合需要乳化,形成油包水结构。
【MP弗氏佐剂】
1)纯进口原料,品质有保障,乳化后结构稳定;
2)产品经过灭菌处理,保质期长,使用安全;
3)货期短,多种规格种类;
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