8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠,简称SNAC,是一种氨基酸衍生物吸收促进剂,能促进肝素及人生长激素等多种蛋白质类药物溶液的口服吸收,且可用于治疗胃肠道疾病,具有较好的应用前景。
用户提供了SNAC [8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠] 的系统适用性溶液(液体),并反馈使用其他公司的C18(4.6*250mm,5μm)色谱柱,按照现有方法进行分析时,可以得到满足分离要求的分析结果,但目前使用的色谱柱耐用性一般。希望大曹三耀实验室可以推荐一款在满足分离要求的同时寿命较好的色谱柱。
用户提供的分析方法中,流动相中缓冲盐的pH值为6.70-6.75,起始有机相比例为10%,实验室首先选用了可以在100%水相下稳定使用的CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱,和同样可以在100%水相下稳定使用的特殊金刚烷基键合的CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱,按照用户提供的分析方法,分别对系统适用性溶液进行了分析。
具体分析结果如下:
CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6mm i.d.×250mm,按照用户提供的分析方法,对系统适用性溶液进行了分析,结果见图1和表1。各成分峰之间的分离度均大于1.5,满足用户要求。
图1 AQ色谱柱分析结果
表1 各峰积分结果表
色谱条件:
色谱柱:CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250
流动相:A:0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾2.72 g,加水1000 mL溶解,用2 mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至6.70-6.75);B:乙腈
B% 10%(0 min)-25%(40 min)-80%(50 min)-80%(60 min)-10%(60.1 min)-10%(70 min)
流动速:0.8 mL/min
温动度:35 °C
检动测:PDA 230 nm
样动品:系统适用性溶液(用户提供)
进样量:10 µL
CAPCELL PAK ADME-HR S5; 4.6mm i.d.×250mm,按照用户提供的分析方法,对系统适用性溶液进行了分析,结果见图2和表2。各成分峰之间的分离度均大于1.5,满足用户要求。
图2 ADME-HR色谱柱分析结果
表3 各峰积分结果表
色谱条件:
色谱柱:CAPCELL PAK ADME-HR S5; 4.6×250
流动相:A:0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾2.72 g,加水1000 mL溶解,用2 mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至6.70-6.75);B:乙腈
流动相:B% 10%(0 min)-25%(40 min)-80%(50 min)-80%(60 min)-10%(60.1 min)-10%(70 min)
流动速:0.8 mL/min
温动度:35 °C
检动测:PDA 230 nm
样动品:系统适用性溶液(用户提供)
进样量:10 µL
从以上实验结果可知,CAPCELL PAK C18 AQ和CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱均能满足用户分析方法中对8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠的分离要求,并且均可以在100%水相下使用,pH值使用范围均为2-9。
为了更好的延长色谱柱使用寿命,尝试降低流动相pH值。使用0.02 mol/L的磷酸缓冲盐(pH值约为4.6),其他条件不变,对系统适用性溶液进行了分析,结果见图3和表3。其中,前两个峰的分离度为1.327,从峰高判断,这两个峰的出峰顺序可能发生了翻转,其他峰之间的分离度均大于1.5,但保留时间都有所延长,所以,流动相的pH值对出峰顺序、保留时间和分离度都有较大的影响,此时,如果考虑调整pH值,需要相应的调整洗脱梯度才可能获得良好的分析结果。
图3 AQ色谱柱分析结果(调整缓冲盐pH值后)
表3 各峰积分结果表
色谱条件:
色谱柱:CAPCELL PAK C18 AQ S5; 4.6×250
流动相:A:0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(取磷酸二氢钾2.72 g,加水1000 mL溶解);B:乙腈
流动相:B% 10%(0 min)-25%(40 min)-80%(50 min)-80%(60 min)-10%(60.1 min)-10%(70 min)
流动速:0.8 mL/min
温动度:35 °C
检动测:PDA 230 nm
样动品:系统适用性溶液(用户提供)
进样量:10 µL
结 论
按照客户提供的分析方法,使用CAPCELL PAK C18 AQ和CAPCELL PAK ADME-HR色谱柱对8-(2-羟基苯甲酰胺基)辛酸钠进行分析,均能得到满足分离要求的分析结果,由于该方法使用C18色谱柱,并且起始有机相比例较低,所以推荐使用CAPCELL PAK C18 AQ色谱柱进行分析。
考虑到色谱柱寿命、流动相中缓冲盐的pH值和初始有机相的比例等因素,尝试将流动相中的水相调整为0.02 mol/L的磷酸缓冲盐(不调节pH值,其pH值约为4.6),其他条件不变进行分析,此时系统适用性溶液中前两个峰的分离度下降为1.327,且从峰高判断,这两个峰的出峰顺序可能发生了翻转,其他峰之间的分离度均大于1.5,但保留时间都有所延长。流动相的pH值对出峰顺序、保留时间和分离度都有较大的影响,也可根据具体情况对流动相条件进一步优化。
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