酶联生物猪衣原体抗体检测试剂盒检验结果的解释

酶联生物猪衣原体抗体检测试剂盒检验结果的解释
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猪衣原体抗体检测试剂盒【包装规格】 96T×1/盒、96T×2/盒

预期用途猪衣原体病是由鹦鹉热衣原体(Chlamydia Psittaci,CP)引起的一种慢性接触性传染病,临床表现多样化,病理变化也较为复杂。

本试剂盒用于检测猪血清中鹦鹉热衣原体抗体,可作为感染猪的血清学诊断指标。

原理

本试剂盒系由预包被鹦鹉热衣原体抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪鹦鹉热衣原体抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有鹦鹉热衣原体抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有猪鹦鹉热衣原体抗体。

猪衣原体抗体检测试剂盒【

储存及有效期 于2~8℃避光保存,有效期为12个月。

包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。

适用仪器含450nm、630nm波长的酶标仪,37℃恒温设备,可调微量移液器。

样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。

2.用样品稀释液将待检血清按100倍稀释(如2μl血清加入198μl样品稀释液中,混匀)。阴、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释。

检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。

3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀,置37℃反应30分钟。

5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。

6.每孔加酶标记物50μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。

7.洗涤,同步骤5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。

参考值 实验正常的情况下,阴性对照≤0.15,阳性对照≥0.5。

检验结果的解释

1.C.O(临界值)=2.1×阴性对照孔均值(阴性对照孔均值低于0.08时以0.08计算)。

2.样品A值≥C.O为阳性;样品A值<C.O为阴性。

试验方法的局限性

该试验仅作为定性检测猪鹦鹉热衣原体抗体,根据A值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。

猪衣原体抗体检测试剂盒【注意事项】

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

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