脂肪酶检测试剂盒原理采用间接竞争ELISA方法检测猪尿、组织、饲料中的沙丁胺醇,在微孔条上预包被上偶联抗原,利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的,样本中的沙丁胺醇和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗沙丁胺醇抗体,再加入酶标二抗,用TMB底物显色,样品中的沙丁胺醇含量与样品的吸光度值呈反比,与标准曲线比较即可得出沙丁胺醇含量。
脂肪酶检测试剂盒操作步骤
1.将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出,置室温(20-25 ℃)平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2.按需要取出微孔条及板架,将不用的微孔板重新密封,保存于2-8 ℃,不要冷冻。
3.加标准品/样本50 μL /孔,然后加入抗体工作液50 μL /孔,再振荡混匀,用封板膜盖板,37 ℃反应30 min。
4.洗板4-5次,每次浸泡30秒,拍干。
5.加入酶标记物100 μL /孔,用封板膜盖板,37 ℃反应20 min。
6.洗板4-5次,每次浸泡30 s,拍干。
7.显色:每孔加入底物缓冲液50 μL,再加底物液50 μL,轻轻振荡混匀,37 ℃环境避光显色10 min。
8.测定:每孔加入终止液50 μL,轻轻振荡匀,设定酶标仪于450 nm处(在20 min内读完数据),测定吸光度值。
脂肪酶检测试剂盒安全性
1. 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2. 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
4. 试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
5. 实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
6. 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
7. 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
8. 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
9. 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
10. 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
11. 加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
12. 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
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