兔白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒操作手册

兔白细胞介素1β（IL-1β）酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定兔血清，血浆及相关
液体样本中白细胞介素1β（IL-1β）的含量。
兔白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中兔白细胞介素1β（IL-1β）水平。用纯化的兔白细
胞介素1β 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素1β，
再与HRP 标记的羊抗兔抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底
物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的IL-1β 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），
通过标准曲线计算样品中兔白细胞介素1β（IL-1β）浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存
说明书1 份1 份
封板膜2 片（48） 2 片（96）
密封袋1 个1 个
酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存
兔白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒标准品：90ng/L 0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
终止液3ml×1 瓶6ml×1 瓶2-8℃保存
20 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶30ml×1 瓶2-8℃保存
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20 分钟，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20 分钟后，离心
20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20 分钟左右（2000-3000 转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞
2
兔白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分
钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心20 分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10 孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl 弃掉，再各取50μl 分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为60 ng/L，40ng/L ，20ng/L，10ng/L，5ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样
品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水20 倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 兔白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
3
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R 值为0.990 以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
检测范围：
4ng/L -80ng/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月

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绵羊补体片段3b受体(C3bR)ELISA试剂盒     Sheep Complement fragment 3b rccptor,C3bR ELISA试剂盒     

绵羊白介素2受体(IL-2R)ELISA试剂盒     Sheep Interleukin-2 receptor,IL-2R ELISA试剂盒     

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猴白介素2(IL-2)ELISA试剂盒     Monkey Interleukin 2,IL-2 ELISA试剂盒    

猴Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)ELISA试剂盒      Monkey Collagen Type Ⅳ,Col Ⅳ ELISA试剂盒    

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猴透明质酸(HA)ELISA试剂盒      Monkey Hyaluronic acid,HA ELISA试剂盒    

猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA试剂盒     Monkey β2-microglobulin,BMG/β2-MG ELISA试剂盒    

猴B病毒(BV)ELISA试剂盒     Monkey B virus Infections ELISA试剂盒    

猴载脂蛋白B100(apo-B100)ELISA试剂盒      Monkey apoprotein B100,apo-B100 ELISA试剂盒    

猴载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒      Monkey apoprotein A1,apo-A1 ELISA试剂盒    

猴白介素6(IL-6)ELISA试剂盒     Monkey Interleukin 6,IL-6 ELISA试剂盒    

猴γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒     Monkey Interferon γ ,IFN-γ ELISA试剂盒    

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马免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒     Equine Immunoglobulin E,IgE ELISA试剂盒     

马β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA试剂盒     Equine amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA试剂盒    

马β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒     Equine Beta-Endorphin,β-EP ELISA试剂盒    

山羊磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA试剂盒     Goat Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK ELISA试剂盒     

山羊P选择素(P-Selectin/CD62P/GMP140)ELISA试剂盒     Goat P-Selectin/CD62P/GMP-140 ELISA试剂盒