昆虫过氧化氢酶（CAT）ELISA试剂盒操作方法

昆虫过氧化氢酶（CAT）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围： 96T
0.4mU/L -20 mU/L
使用目的：
本试剂盒用于测定昆虫样本中过氧化氢酶（CAT）活性。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中昆虫过氧化氢酶（CAT）水平。用纯化的昆虫过
氧化氢酶（CAT）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入过氧化氢
酶（CAT），再与HRP 标记的过氧化氢酶（CAT）抗体结合，昆虫过氧化氢酶（CAT）ELISA试剂盒形成抗体-抗原-酶标抗体复合
物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作
用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CAT）呈正相关。用酶标仪在
450nm 波长下测定吸光度（OD 值），昆虫过氧化氢酶（CAT）ELISA试剂盒通过标准曲线计算样品中过氧化氢酶（CAT）活性浓
度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶
2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（32mU/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份
5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张
6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，昆虫过氧化氢酶（CAT）ELISA试剂盒提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
16mU/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
8mU/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
4mU/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2mU/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
1mU/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 昆虫过氧化氢酶（CAT）ELISA试剂盒洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止
液后15 分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，
即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值
大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月

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GS-E20232     小鼠骨保护素配体(OPGL)ELISA试剂盒     Mouse Osteoprotegerin Ligand,OPGL ELISA试剂盒    

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GS-E20235     小鼠铁蛋白(FE)ELISA试剂盒     Mouse ferritin,FE ELISA试剂盒    

GS-E20236     小鼠碳酸酐酶2(CA-2)ELISA试剂盒     Mouse carbonic anhydrase 2,CA-2 ELISA试剂盒    

GS-E20237     小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA试剂盒     Mouse pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA试剂盒    

GS-E20238     小鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒     Mouse A Disintegrin And Metalloprotease 8,ADAM8 ELISA试剂盒    

GS-E20239     小鼠抗胰蛋白酶(AT)ELISA试剂盒     Mouse Anti-trypsin,AT ELISA试剂盒    

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GS-E20241     小鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒      Mouse Kidney injury molecule 1,Kim-1 ELISA试剂盒    

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GS-E20244     小鼠抗平滑肌抗体(ASMA)ELISA试剂盒     Mouse Anti-Smooth Muscle Antibody,ASMA ELISA试剂盒    

GS-E20245     小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA试剂盒     Mouse Embryonic Stem MESPU30,M30 ELISA试剂盒    

GS-E20246     小鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)ELISA试剂盒     Mouse nuclear factor-κB p65,NF-κB p65 ELISA试剂盒    

GS-E20247     小鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)ELISA试剂盒     Mouse platelet membrane glycoprotein ⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢa ELISA试剂盒    

GS-E20248     小鼠游离脂肪酸(FFA)ELISA试剂盒     Mouse free fatty acids,FFA ELISA试剂盒    

GS-E20249     小鼠血小板反应蛋白/凝血酶敏感蛋白1(TSP-1)ELISA试剂盒     Mouse thrombospondin 1,TSP-1 ELISA试剂盒    

GS-E20250     小鼠骨粘连蛋白(ON)ELISA试剂盒     Mouse osteonectin,ON ELISA试剂盒    

GS-E20251     小鼠叶酸(FA)ELISA试剂盒     Mouse Folic acid,FA ELISA试剂盒    

GS-E20252     小鼠组蛋白H2b(histon-H2b)ELISA试剂盒     Mouse histon-H2b ELISA试剂盒    

GS-E20253     小鼠血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)ELISA试剂盒     Mouse Vascuolar cell adhesion molecule 1,VCAM-1 ELISA试剂盒     

GS-E20254     小鼠糖皮质类固醇受体(GR)ELISA试剂盒     Mouse glucocorticoid receptor,GR ELISA试剂盒    

GS-E20255     小鼠黄体生成素释放激素(LHRH)ELISA试剂盒     Mouse Luteinizing Hormone-Releasing Hormone,LHRH ELISA试剂盒    

GS-E20256     小鼠脑红蛋白(NGB)ELISA试剂盒     Mouse Neuroglobin,NGB ELISA试剂盒    

GS-E20257     小鼠8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA试剂盒     Mouse 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA试剂盒    

GS-E20258     小鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒     Mouse interferon-inducible protein 16,IFI16/p16 ELISA试剂盒    

GS-E20259     小鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒     Mouse Stromal cell derived factor 1a,SDF-1a ELISA试剂盒