VB1 (Vitamin B1) ELISA Kit

上海信裕生物科技有限公司

2015/10/20 15:17

TA的动态

VB1 (Vitamin B1) ELISA Kit

检测原理:

本试剂盒采用竞争ELISA法。用VB1抗原包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的VB1与包被

的VB1竞争生物素标记的抗VB1单抗上的结合位点，游离的成分被洗去。加入辣根过氧化物酶标

记的亲和素，生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物

(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波

长处测OD值，VB1浓度与OD450值之间呈反比，通过绘制标准曲线计算出样品中VB1的浓度。

样品收集:

1. 血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集

血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。

2. 血浆：抗凝剂推荐使用EDTA-Na2，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可

检测。避免使用溶血，高血脂样品。

3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会

影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体

积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。

推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组

织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，

取上清检测。

4. 细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

5. 其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测

具体处理方法可参考：

6. 样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。

7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻

存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。

8. 如果您的样品中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释（建议先

做预实验，以确定稀释倍数）。

试验所需自备物品:

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)

2. 高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水

4. 吸水纸

检测前准备工作:

1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温。

2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结

晶，属于正常现象，可用40℃水浴微加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超

过50℃，使用时洗涤液应为室温）。当日使用

3. 标准品: 于10000×g离心1分钟，加入标准品&样品稀释液1.0mL至冻干标准品中，旋紧管盖，

静置10分钟，上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为300ng/mL）。

然后根据需要进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓

度：300、150、75、37.5、18.75、9.375、4.688、0ng/mL，标准品&样品稀释液直接作为空

白孔0ng/mL。如配制150ng/mL标准品：取0.5mL300ng/mL的上述标准品加入含有0.5mL标准

品&样品稀释液的EP管中，混匀即可，其余浓度依此类推。

4. 生物素化抗体工作液：实验前计算当次实验所需用量（以50μL/孔计），实际配制时应多配

制100-200μL。使用前15分钟，以生物素化抗体稀释液稀释浓缩生物素化抗体(1:100)成工作

浓度。当日使用。

5. 酶结合物工作液：实验前计算当次实验所需用量（以100μL/孔计），实际配制时应多配制

100-200μL。使用前15分钟，以酶结合物稀释液稀释浓缩HRP酶结合物(1:100)成工作浓度。

当日使用。

标准品稀释方法图例：（以500μL/管为例，也可根据实际用量来稀释，如200μL/管）

阅读71次

关注

上一篇 VA (Vitamin A) ELISA Kit

下一篇 VB6 (Vitamin B6) ELISA Kit