直接凝集反应
某些病原微生物或红细胞悬液等颗粒性抗原与相应抗体结合,在有适量电解质存在下,经过一定时间出现肉眼可见的凝集小块,称为凝集反应(agglutination)。
根据反应的方式不同,凝集反应可分为直接凝集反应、间接凝集反应和抗球蛋白试验等。直接凝集反应时颗粒性抗原和相应抗体直接结合,在有电解质存在的条件下,出现肉眼可见的凝集小块,为直接凝集反应。有玻片凝集法和试管凝集法。前者是一种定性实验,多用已知诊断血清检验未知抗原和进行细菌分型,也可以用来鉴定人类红细胞ABO血型;后者是一种半定量试验,用于鉴定被检者血清中有无某些病原菌的抗体及其含量,以协助临床诊断或供流行病学调查研究。本节将通过玻片凝集法和试管凝集法详细介绍直接凝集反应。
(一)玻片凝集试验
(1)取洁净载玻片1片,一端滴生理盐水1滴作为对照,另一端滴加诊断血清1滴。
(2)用接种环取分离好的病原菌,于生理盐水中和诊断血清中分别混匀(注意不可先涂血清后涂盐水以免发生误差)。
(3)室温静置数分钟。如果抗原抗体相对应出现阳性反应,则诊断血清中出凝集块,而盐水侧则为均匀的乳白色。否则为阴性反应。
(二)试管凝集反应
(1)排列洁净干燥试管8支于试管架上。
(2)用吸管吸取生理盐水,分别加0.5ml于各试管中。吸取10倍稀释的被检血清,加0.5ml于第一管中。
(3)自第一管开始稀释,使充分混合,然后吸出0.5ml放入第二管,依次稀释至第七管,在从第七管内吸出0.5ml弃去。第一管至第七管血清稀释度为1∶20,1∶40,1∶80,1∶160, 1∶320,1∶640;1∶1280。第八管不加血清,作为对照。
(4)吸取诊断菌液,每管加0.5ml(加菌液时由对照管向前依次加入),此时每管内的血清稀释度又增加一倍。其操作程序见表15-1。
(5)摇匀后,放37℃温箱18~24h或37℃水浴箱4h后观察结果。观察结果时先观察对照管,再观察各试验管。注意观察凝集颗粒的松软、大小、均匀度等性状以及液体的混浊程度。若液体仍呈均匀混浊或经振摇后呈混浊者为阴性结果;上部液体较清亮,同时管底有凝集块者为阳性反应。阳性反应者可根据下面标准确定凝集的强弱。
++++ : 完全凝集、上清液澄清。
+++ :大部凝集、上清液微混。
++ :中等凝集、上层液较混浊。
+ :少量凝集、上层液混浊。
- :无凝集、菌液混浊。
记录结果后判定效价(又称滴度)。凝集效价是指能发生中等凝集(++)现象的最高血清稀释度。
实战分享|小鼠淋巴细胞的提取和分选之经验小结
实战分享 | 原生细胞的合成之经验分享
实验常用人肝癌细胞株(HepG2/Hep3B,HuH-7,MHCC97H,PLC/PRF/5)怎么选
原代细胞的培养方法及注意事项
相关产品
GelstainRedTM 核酸染料, 10,000× in water
Super GelBlueTM 核酸染料, 10,000× in water
彩色预染蛋白Marker(10-180 kDa,三色)
彩色预染蛋白Marker(10-250kDa, 双色)
琼脂糖 A2015
Super ECL Plus(超敏化学发光检测试剂盒) S6009M
PAGE 彩色快速凝胶制备试剂盒(10%)
Minerva Super Fusion Cloning Kit(无缝克隆试剂盒)
Cell Counting Kit-8(CCK-8)细胞增殖检测试剂盒
FITC-Annexin V/PI 细胞凋亡试剂盒
1,5-AG(1,5-Anhydroglucitol) ELISA Kit XY9U2590
Recombinant Tyrosine 3/Tryptophan 5 Monooxygenase Activation Protein Theta (YWHAq) XY95200RPHu01
Recombinant Spindlin 1 (SPIN1) XY94760RPHu
OVA Conjugated Leucine (Leu) XY95654CPSGe
Recombinant Peroxiredoxin 5 (PRDX5) XY93776RPMu02
关注
拨打电话
留言咨询