ELISA标本的处理
可用作 ELISA 测定的标本十分广泛,体液(如血清)、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液)、
细胞培养上清、细胞、组织等均可作标本以测定其中某种成份。有些标本可直接进行测定,有些
则需经预处理。
◆ 血清:
室温血液自然凝固 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。收集上清。如
有沉淀形成,应再次离心。
◆ 血浆:
应根据试剂盒的要求选择 EDTA 、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,加入 10 %( v/v )抗凝剂
( 0.1M 柠檬酸钠或 1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2) 混合 10-20 分钟后,离心 20 分钟左右
( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形 成,应再次离心。
◆ 尿液、胸腹水、脑脊液:
用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集上清。如有沉淀形成,
应再次离心。
◆ 细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集
上清。检测细胞内的 成份时,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100 万
/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转
/ 分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
◆ 细胞:
检测细胞的成份时,对于贴壁细胞,去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。加
入适量裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞10 秒后,细胞
就会被裂解。对于悬浮细胞,离心收集细胞,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍.加入适
量裂解液, 用枪吹打把细胞吹散。用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉
淀。如果细胞量较多,必需分装然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g离心3-5 分钟,取上
清,即可进行后续操作。
◆ 组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS 或组织蛋白萃取试剂,缓冲液中可加入蛋白酶抑制
剂。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右( 2000-3000 转 / 分)。仔细收集
上清置于 -20 度或 - 70 度保存,如有必要,可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测,其余
冷冻备用。
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