资料摘要
资料下载实验方法原理 TA克隆 系统由Invitrogen公司(San Diego,CA)发展而来的商业性试剂盒,它用于PCR 产物的克隆 和测序。其原理是利用Taq酶能够在PCR 产物的3'末端加上一个非模板依赖的A,而T载体是一种带有3'T突出端的载体,在连接酶作用下,可以快速地、一步到位地把PCR 产物直接插入到质粒载体的多克隆 位点(MCS)中。 外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组,这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种:T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在一起的功能,而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌DNA连接酶没有的特性,即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接率低,一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。 T4噬菌体DNA 连接酶催化DNA 连接反应分为3 步:首先,T4 DNA 连接酶与辅因子ATP形成酶-ATP复合物;然后,酶-ATP复合物再结合到具有5'磷酸基和3'羟基切口的DNA上,使DNA腺苷化;最hou产生一个新的磷酸二酯键,把切口封起来。连接反应通常将两个不同大小的片断相连。因为DNA片断有两个端点,所以切割时出现两种可能,一种是单酶切,另一种是双酶切,这两种酶切方法在基因工程操作中都经常用到。对于单酶切来说,载体与供体的末端都相同,连接可以在任何末端之间进行,这样就导致了大量的自连接产物。为了减少自环的高本底,可对载体进行5'除磷酸处理,原理是连接酶只能连接DNA片断的3'OH末端与5'端,所以除磷后载体不会自环。一旦有外源片断插入时,由外源片断提供5'端就能与载体进行连接。通过这种方法可大大减少由载体的自环造成的高本底。对于双酶切来说,无论载体与供体同一片段上都有不同的末端,这样就避免了载体与供体的自环,能使有效连接产物大大增加。双酶切的另一个特点是能将供体分子定向连接到载体上。 连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性。但是在这个温度下粘末端的氢键结合是不稳定的。因此采取折中的温度,即12-16℃,连接12-16h(过夜),这样既可最da限度地发挥连接酶的活性,又兼顾到短暂配对结构的稳定。Taq DNA酶扩增的PCR产物,其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱基,可以与pGEM-T Easy Vector 末端游离的T碱基互补形成环状重组T质粒。
人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)ELISA试剂盒使用说明书
简介:人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)elisa试剂盒 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被的微孔中依次加入人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab),再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)浓度。 Elisa试剂盒组成: (1)结合物及标本的稀释液; (2)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水; (3)酶标记的抗原或抗体(结合物); (4)酶的底物; (5)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),elisa试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中); 操作步骤: 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支。 2. 加样:分别设空白孔(空白对
人PL12抗体抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12AlaRS)ELISA试剂盒操作步骤
简介:产品名称:人PL12抗体/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)Elisa试剂盒 产品规格:48T/96T 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中指标水平。用纯化的指标抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入指标,再与HRP标记的-O-甲基转移酶(COMT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过 洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度 (OD值),通过标准曲线计算样品中指标浓度。 人PL12抗体/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)Elisa试剂盒组成: (1)结合物及标本的稀释液; (2)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水; (3)酶标记的抗原或抗体(结合物); (4)酶的底物; (5)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),elisa试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中); 人PL12抗体/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)Elisa试剂盒操作步骤: 1.
人PL7抗体/抗苏氨酰tRNA合成酶(PL7)ELISA试剂盒操作步骤
简介:本试剂仅供研究使用 人PL7抗体/抗苏氨酰tRNA合成酶(PL7)ELISA试剂盒 试验原理: PL7试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知PL7浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将PL7物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中PL7的活性浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制 96/48份酶标板 1块板(96T) 半块板(48T) 即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品:400ng/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型 生物素标记的PL7抗体 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型 洗涤缓冲液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按说明书进行
人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒操作步骤
简介:产品名称:人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)Elisa试剂盒 产品规格:48T/96T 本试剂盒仅供科研实验使用! 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中指标水平。用纯化的指标抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入指标,再与HRP标记的-O-甲基转移酶(COMT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过 洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的指标呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度 (OD值),通过标准曲线计算样品中指标浓度。 试剂盒组成: (1)结合物及标本的稀释液; (2)洗涤液,在板式ELISA中,常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水; (3)酶标记的抗原或抗体(结合物); (4)酶的底物; (5)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),elisa试剂盒参考标准品和控制血清(定量测定中); 洗板方法 A 手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。 B 自动洗板机:每孔注入洗液3
人抗Q热抗体(anti-Q-Ab)ELISA试剂盒实验原理
简介:本试剂仅供研究使用 人抗Q热抗体(anti-Q-Ab)ELISA试剂盒 试验原理: anti-Q-Ab试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验(ELISA).已知anti-Q-Ab浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将anti-Q-Ab物素标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中anti-Q-Ab的活性浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制 96/48份酶标板 1块板(96T) 半块板(48T) 即用型 塑料膜板盖 1块 半块 即用型 标准品:400ng/ml 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按说明书进行稀稀 空白对照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型 标准品稀释缓冲液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型 生物素标记的anti-Q-Ab抗体 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型 洗涤缓冲液
相关产品
鸭子神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒
鸭子磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA试剂盒
鸭子催乳素(PRL/LTH)ELISA试剂盒
鸭子刺鼠相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒
鸭免疫球蛋白E(IgE)ELISA检测试剂盒
鸭环磷酸腺苷(cAMP)ELISA检测试剂盒
菠菜蔗糖磷酸合酶(SPS)ELISA试剂盒
菠菜葡萄糖苷酸酶β(GUSβ)ELISA试剂盒
菠菜凝集素(PHA)ELISA试剂盒
菠菜硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒
菠菜交替氧化酶(AOX)ELISA试剂盒
吲哚乙酸氧化酶测试盒 可见分光光度法
果胶裂解酶测试盒 微量法
吲哚乙酸氧化酶测试盒 微量法
多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒 可见分光光度法
关注
拨打电话
留言咨询