六种方法鉴定单克隆抗体的性质!当获得多个杂交瘤细胞株时,要了解哪一株是最适用的,则一定要通过各种鉴定。远慕生物分析常见的方法有:
(一)Ig类型测定
通常以免抗小鼠Ig类及亚类抗体与培养液中单克隆抗体按双向琼脂扩散法进行测定,确定其Ig类型或Ig亚类型别。
(二)特异性测定
把与相应抗原有关的物质同McAb进行多种免疫学检测,鉴定McAb的特异性。这直接关系到McAb应用的可靠性。
(三)抗体效价测定
效价以腹腔积液或培养液的稀释度表示,稀释度越高,则抗体效价也越高。在凝集反应中,腹腔积液效价可达5万以上;在ELISA中,腹腔积液效价可达100万以上。如ELISA效价低于10万,用于诊断测定将不会达到很高的敏感度,应重新制备。
(四)表位测定
通过双向琼脂扩散法,把两种McAb混合,加入于同一孔中,对孔放相应的抗原,如出现两条沉淀线可证明两者为抗不同表位的McAb;利用ELISA双抗夹心法,将一种McAb作包被抗体,另一作酶标记,其中加入抗原,如显色,则证明两者抗不同的表位。
(五)亲和力测定
只有当抗原与抗体结合部位结构完全吻合时,抗体的亲和力。这种结合力以抗原抗体反应平衡时,抗原与抗体浓度的乘积与抗原抗体复合物浓度之比表示。如亲和力太低,会严重影响测定的敏感性。
(六)染色体分析
正常鼠的脾细胞染色体数:40,全部为端着丝粒;小鼠骨髓瘤细胞染色体:SP2/0细胞为62—68,NS-1为54~64。大多数为非整倍性,有中部和亚中部着丝点。杂交瘤细胞的染色体数目接近两亲本细胞染色体数目的总和,在结构上多数为端着丝粒染色体外.还应出现少数标志染色体。染色体数目多且较集中的杂交瘤细胞分泌高效价的抗体。
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