缓冲液的品种非常多,比如常见的有HEPES缓冲液,磷酸盐缓冲液,Tris缓冲液,甘氨酸缓冲液,虽然我们都知道这些缓冲液有很多的优点,但同时也有着不可避免的缺点;本文将为您一一进行揭晓,我们只有把这些问题弄清楚了,才可以更加清楚的去选择适合的缓冲液。
HEPES缓冲液的配制方法主要有哪些
一、500ml 1 MHEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制
119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中,加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2),然后用蒸馏水定容至500ml,于4摄氏度保存。
二、加少量盐的HEPESBuffer配方(500ml)
HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值,最后定容。
三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制
将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水,用0.5M NaOH调节至所需pH值,再用蒸馏水定容至100ml即可。
A、HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lNNaOH 调pH至7.2,滤过除菌后使用。此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。
B、亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L),使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液,最终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法:取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中,用lN NaOH调pH至7.5一8.0,然后用水定容至100ml,过滤除菌,分装小瓶(2ml/瓶),4℃或-20℃保存。
需要注意的是,HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L,对细胞无毒性作用。一般情况下,浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。现在市售HEPES为约10g包装的小瓶,大家根据实际情况正确灵活配制就可以。
看完如何选择缓冲液,HEPES缓冲液的配制方法这篇文章后,相信你对缓冲液也有进一步的了解,由于缓冲液多见用于科研实验上,所以我们在实验过程中一定要保证产品的质量,了解相关的配制方法及使用方法等都是每一个实验人员需要知道的,如果你对缓冲液还有什么好的见解,欢迎和我们一起来讨论。
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