远慕讲述:维生素C含量的测定实验

上海远慕生物科技有限公司

2018/08/28 10:57

维生素c是人类营养中最重要维生素之一，缺乏时会产生坏血病。水果、蔬菜是供给人类维生素c的主要来源。通过对维生素c含量的测定，可以了解果品质量的高低，并掌握这一测定方法。利用染料2,6-二氯酚靛酚作氧化剂，可将还原态的维生素c氧化成脱氢维生素c，而染料本身被还原成无色的衍生物。2,6-二氯酚淀粉在酸性条件下呈红色。

实验方法原理:

利用染料2,6-二氯酚靛酚作氧化剂，可将还原态的维生素c氧化成脱氢维生素c，而染料本身被还原成无色的衍生物。2,6-二氯酚淀粉在酸性条件下呈红色。在滴定终点之前，滴下的2，6-二氯酚淀粉立即被还原成无色。当溶液从无色转变成为红色时，即为滴定终点。

实验步骤:

一、试剂

1. 实验材料：水果或蔬菜。

2. 仪器：（1）微量滴定管；500毫升×1；（2）量瓶：50毫升×2；（3）三角瓶；500毫升×2；（4）研钵；（5）量筒；（6）刻度吸管；10毫升×2；

3. 试剂：

（1）1%草酸：秤取5.0克草酸溶于少量蒸馏水中，定容至500毫升。

（2）2%草酸：秤取10.0克草酸溶于少量蒸馏水中，定容至500毫升。

（3）0.001n 2，6-二氯酚靛酚钠溶液：称取干燥的2，6-二氯酚靛酚钠60毫克，放入200毫升量瓶中，加热蒸馏水中100-150毫升，滴加0.01n naoh4-5滴，强烈摇动10分钟冷却后加水至刻度。摇匀后用紧密滤纸滤于棕色瓶中，贮于冰箱中备用，有效期一周。使用前需标定.

实验过程

1. 样品的处理和提取：

称取4.0克新鲜样品，至研钵中，加5毫升2%草酸，研成匀浆。通过漏斗将样品提取液转移到50毫升量瓶中。残渣再用2%草酸提取2-3次，提取液及残渣一并转入量瓶。2%草酸总量为35毫升，最后以水定容。溶液定容时若泡沫较多，可加几滴乙醇消除泡沫后再定容。摇匀，过滤，滤液备用。

2. 样品的测定：

吸取滤液10毫升，放入50毫升三角瓶中，立即用2,6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至出现明显的红色，并在15秒内不消失为止。记录所用滴定液体积。

3. 空白测定：

在另一50毫升三角瓶内，放入35毫升2%草酸，并用1%草酸定溶，摇匀，取此液10毫升放入另一50毫升三角瓶内，用2,6-二氯酚靛酚钠滴定至终点，记录染料用量。

x：100克样品所含维生素c毫克数（毫克/100克）

w：称取样品重（克）

v1：滴定样品所用染料毫升数

v2：滴定空白所用染料毫升数

v：样品提取液稀释之总体积（即50毫升）

k：1毫升染料液所能氧化维生素c之毫克数，可由标定算出

注意事项:

mso-bidi-language:ar-sa">二氯酚靛酚钠溶液的标定：准确称取维生素c20毫克，用1%草酸溶解定容至200毫升。吸取此液10毫升，以1%草酸再次稀释定容至200毫升。吸取此液10毫升，放入50毫升三角瓶中（同时吸取10毫升1%草酸于另一个50毫升三角瓶中，做空白对照立即用所要标定的2，6-二氯酚靛酚钠滴定至粉红色出现15秒不消失，记录所用毫升数，按下式计算k值（即1毫升染料所能氧化抗坏血酸的毫克数）。

(式中：g为称取维生素c的毫克数。v为滴定10毫升标准维生素c时所用去染料的毫升数，与滴定空白所用毫升数之差值)

2. 操作要尽可能快，并防止与铁铜器具接触，以减少维生素c的氧化。

3. 草酸及样品的提取液避免日光直射。

4. 当样液本身带色时，测定前于提取液中加2-3毫升二氯乙烷。在滴定过程中当二氯乙烷由无色变粉红色时，即达终点。

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