细胞消化知识你知道多少？

上海远慕生物科技有限公司

2019/01/10 16:57

无论是原代细胞还是细胞系或癌细胞，细胞长满瓶后，需要对细胞进行传代或将细胞收集起来用作其他实验。贴壁生长的细胞必须要做的一步便是消化过程，下面便对细胞消化、中和、洗涤等过程做个简单介绍。

1、绝大部分细胞消化的时候是只需用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留胰酶附着在细胞表面在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，这样连续传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。

2、什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙状移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，就应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的，吹打不超过20次后（一般10次即可），成小规模聚集（10个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间。

3、EDTA的作用。许多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA联合作用。这里要明白，trypsin切割细胞外基质的一些负责粘连和附着的蛋白，而EDTA通过螯合Ca²⁺，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加温和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者对付特别难消化的细胞，添加多一些EDTA，就是这个道理。一般不要试图延长消化时间（如果10min还消化不彻底的话），而应该想其它办法。针对如上情况，美国ScienCell公司专门配制了胰酶浓度为0.25%的trypsin/EDTA消化液（T/E，货号#030) 和胰酶浓度为0.05%的trypsin/EDTA消化液（T/E，货号# 0183）

4、PBS洗涤。消化之前用PBS洗涤，是常见的操作，因为Serum含有抑制trypsin的蛋白。对于一些难消化的细胞，可以配制不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS，因为这些离子也会抑制trypsin的活性。美国ScienCell公司也有配好的不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS，即DPBS（货号#0303）。

5、胰酶的中和。细胞消化完之后，因为残留的胰酶对细胞有伤害作用，需要将胰酶中和掉，就需要用到胰酶中和液。美国ScienCell的胰酶中和液（TNS，货号#0113）,含有10%的胎牛血清作为胰酶抑制剂和细胞保护剂。

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