正常的活细胞,胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使之不能够进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜的通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失,即可认为细胞已经死亡,这与中性红作用相反。因此,借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。
注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现 象。台盼蓝染色后,通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数,就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。台盼蓝染色只需3-5分钟即可完成,并且操作非常简单。
用品:
1. 4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。
2. 吸管、血细胞计数板、显微镜
步骤:
1、制备单细胞悬液。并作适当稀释(106 细胞/ml)
2、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。
3、计数:在三分钟内,用计数板分别计数活细胞和死细胞
结果统计:
镜下观察,死细胞被染成淡蓝色,而活细胞拒染。
根据下式求细胞活力:
活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100
注意事项:台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。
台盼蓝染色方法:
A:胎盼蓝母液∶5×生理盐水=4∶1
B:台盼蓝A液∶细胞悬液=1∶2=20 μL∶40 μL
活细胞数=稀释倍数×1.5×104×四个方框总胎盼蓝拒染活细胞数/4
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