Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料,常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建,DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义。疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。
常用的检测核酸的方法有:
1)紫外吸光法(A260),该法操作简便,但DNA样品中核苷酸、单链DNA、RNA和蛋白质对紫外吸收信号影响很大,还容易受到核酸样品中污染物的干扰,不能区分DNA和RNA,而且灵敏度低(ΔA260=0.1相当于5ug/ml的dsDNA);
2)探针杂交法,该法是传统检测微量DNA的常用方法,基本能满足目前疫苗和治疗性生物制品的检测需求,但是该法耗时较长,操作繁琐,稳定性、敏感性和特异性较差;
3)Hoechst33258染料法,Hoechst33258是一种一定程度上特异于双链DNA的核酸染料,基本不受蛋白质的干扰,可以检测低至10ng/ml的DNA;在检测稳定性和灵敏度上仍达不到理想效果。
Picogreen
dsDNA定量法:Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光,且所产生的荧光与DNA浓度呈正比,在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下,可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性,且几乎无序列依赖性,可以精确地测量多个来源的DNA,包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。
相比传统的方法,Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势:
①灵敏度高:数量级较UV吸光读数更敏感,可节省宝贵的样品;
②特异性强:在等摩尔的RNA存在的条件下,对dsDNA具有特异性;
③耐受性好:耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖,可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。
④易于使用——只需在样品中加入染料,等待5分钟,然后读数即可,且适用于96和384孔板;与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。
⑤适用范围广:可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。
若每次分析体积为2 mL,1ml Picogreen定量试剂足够200次分析使用,若使用微孔板或96孔板检测,每次使用量200μl,则足够2000次分析。另外,我公司提供【双链DNA(dsDNA)定量检测试剂盒】方便客户选用。
储存条件:4℃避光干燥,有效期6个月。
注意事项
1)Picogreen定量试剂含有DMSO(已知有毒试剂),请小心操作;
2)尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性,但是该试剂能结合双链DNA,请操作时务必小心。
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