组织细胞培养技术研究的对象不一般,它是具有完整生命力的生物单位,因此与其他一般实验工作不同,要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因素的影响。本文将主要针对细胞培养实验室,讲解建设使用注意事项。
一、基础建设方案之墙顶地
(1)墙体
废物暂存间、强电间、水处理间可采用乳胶漆墙面,其他实验室区域采用玻镁板墙体。玻镁板是氧化镁、氯化镁、和水三元体系,具有防火防水、无味无毒、高强质轻、施工方便、使用寿命长等特点。
(2)天花
防火等级达到A级:天花选用彩钢板。实用美观,且易清洁消毒、光滑防水。
防火等级达到B1级:天花选用铝扣板。可大幅度降低通风和机电施工及维修的难度和强度,也利于日后的正常维护和检修。
(3)地面
地面材料的选择通常要求抗静电、抗菌耐磨、耐腐蚀、防火、防尘、降噪音等,色泽选择和墙体统一或相似的2.2mm厚进口品牌PVC卷材,防火等级为B级以上。
二、细胞实验室的设计分区
细胞培养实验室应能进行六方面的工作:
无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。
无菌操作区——
理想的无菌操作室应划为三部分:
●更衣室:供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。
●缓冲间:位于更衣间与操作间之间。
目的是为了保证操作间的无菌环境,同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。
●无菌操作间:专用于无菌操作、细胞培养。
大小要适当,且其顶部不宜过高(不超过2.5m),以保证紫外线的有效灭菌效果;
墙壁光滑无死角以便清洁和消毒;
工作台安置不应靠墙壁,台面要光滑压塑作表面,漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。
孵育区——本区对无菌的要求虽不比无菌区严格,但仍需清洁无尘,因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行,后者费用高,一般实验室多采用孵箱进行工作。
储藏区——主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等,环境需要清洁无尘。
制备区——主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。
清洗和消毒灭菌区——清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开,主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。
三、保卫细胞,横扫污染源的7大战场
2008年8月,《The Scientist》期刊发表了一篇题为 A case of mistaken identity 的文章,文中指出现已发表的 650 多项研究中所用的乳腺癌细胞可能并不是真正的乳腺癌细胞。
对于细胞培养实验室来说,杜绝一切可能的污染源至关重要。
①细胞房入口:和缓冲间相连,缓冲间内备消毒服装和鞋,口罩等,入内换上。进入后经过洗手-消毒—戴手套-再消毒。
②水浴锅:对其进行定期消毒,也可以向水浴中加入适量的杀菌剂来抑制各种细菌、真菌的滋长。最好用恒温孵育器代替水浴锅,确保温控精确性和均一性的同时也减少了污染的概率。
③显微镜:敞口放置培养皿或培养瓶。防止造成溶液飞溅,或观察时污染物镜,并进一步造成交叉污染。
④CO2 培养箱:对于日常使用来说,至少每月清洁培养箱一次。尽量减少门打开次数,避免对温度、培养基中 pH 值调节的影响。
另外要特别注意,CO2培养箱不能直接放在地板上。
⑤生物安全柜:在开始实验前,必须对超净台进行全面消毒,正确的做法是对整个机柜表面进行擦拭。还有一件事必不可少,那就是事先打开安全柜通风系统,流通空气,直到原有的内部浊气都被排出。
⑥离心机:和显微镜一样,离心机也是交叉污染的重灾区。平日里应保持离心机盖关闭,拒污染于千里之外。离心机内部的小缝隙是藏污纳垢之处,定期清洁转子和腔室至关重要。
⑦窗户 :细胞房通常没有窗户,如果有窗,那么无论什么时段,窗户都不允许打开。同时拉上窗帘,做好请勿开启的警示标记。
四、珍爱生命,看好那个“液氮罐”
1992年,一艘日本放在冻存船的液氮罐外胆破裂,导致原有的罐内9.3bar的正常压力,瞬间变成了68.7bar。接着整条船炸了,方圆400米内的车和房子全部损毁,船被炸出了350米。
另外,液氮罐的作死方式不光是爆炸,还能很温和。
那是爆炸的8年后,在爱丁堡的MRC西城医院冻存细胞的实验人员詹姆斯,由于液氮盖子没关导致的泄露,最终窒息死亡。
这并不是个例,类似的事故时有发生。因此工作人员在进行实验室相关操作的时候,一定要实时控制好液氮柜。这既是对自己生命的负责,也是对他人生命的尊重。
五、找专业人,做专业事
建设一座功能完善的实验室,要由专业的人员进行专业设计,要全面综合考虑,遵循以人为本的原则,建成正规化、标准化的实验室达到最佳的使用效果。
植物检测试剂盒原理和使用方法
白介素ELISA试剂盒结果异常的原因
五种常用细胞组织染色方法介绍
标准物质期间核查内容与方法
相关产品
鸭子神经肽Y(NP-Y)ELISA试剂盒
鸭子磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)ELISA试剂盒
鸭子催乳素(PRL/LTH)ELISA试剂盒
鸭子刺鼠相关蛋白(AGRP)ELISA试剂盒
鸭免疫球蛋白E(IgE)ELISA检测试剂盒
鸭环磷酸腺苷(cAMP)ELISA检测试剂盒
菠菜蔗糖磷酸合酶(SPS)ELISA试剂盒
菠菜葡萄糖苷酸酶β(GUSβ)ELISA试剂盒
菠菜凝集素(PHA)ELISA试剂盒
菠菜硫氧化还原蛋白(Trx)ELISA试剂盒
菠菜交替氧化酶(AOX)ELISA试剂盒
吲哚乙酸氧化酶测试盒 可见分光光度法
果胶裂解酶测试盒 微量法
吲哚乙酸氧化酶测试盒 微量法
多聚半乳糖醛酸酶(PG)测试盒 可见分光光度法
关注
拨打电话
留言咨询