血清学检测是许多健康问题诊断过程中的关键检测方法,包括器官移植筛查,交叉匹配,疾病诊断,监测等。这些检测在临床决策中起着至关重要的作用,免疫分析是目前可用的最强大,最灵敏的血清学检测方法之一,它基于抗原抗体之间的高度特异性结合,即使在低浓度下也能进行定性和定量检测。有多种免疫测定方法,以下是其中最常见两种检测方法示意图,分别是夹心法(图1A)和直接法(图1B),当选择用于夹心法检测的抗人二抗时(图1A),需要考虑一抗的种属,并使用与该物种有最小交叉反应的二抗。
图1:测定方式:A.夹心法,B.直接法
免疫分析在多种疾病诊断起重要作用
各类免疫测定技术各有优缺点,例如,快速测定法(如胶体金侧向流动法)可在数min 内提供定性结果,可进行即时检测,而ELISA可能需要花费数小时才能完成,但可提供定量数据。
而当前严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(SARS-CoV-2)大流行更加凸显了侧向流动分析的优势,由于该疾病具有快速传播和较高的死亡率等特征,美国FDA已采取相关措施,允许各州未经FDA批准就可开展新的SARS-CoV-2检测。该修订允许使用快速检测试剂盒,该试剂盒定性检测患者针对SARS-CoV-2产生的IgG和IgM抗体,从而显著加大了SARS-CoV-2的检测能力,尽可能地减少病毒的传播。尽管侧向流动检测具有明显的优势,但这种分析方法无法提供定量的数据。
表1.几种类型的免疫测定法的优缺点,检测过程,检测的Ig类型
免疫测定方法 | 检测过程 | 可检测免疫球蛋白亚型 |
快速测试/横向流动(胶体金) | 胶体金层析试纸条主要由4个部分组成:在样品区滴加样品后,借助毛细作用,样品泳动至玻璃纤维膜,金标复合物溶解,并与样品进行抗原抗体反应,形成复合物,继续泳动至硝酸纤维素膜的检测区,带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获,呈现条带。而质控线不管有无目的样本,都会与金标抗体进行结合并显色,相当于我们的阳性对照,证明金标抗体是正常的。 | IgG,IgM |
流式细胞 | 将血清样品添加到带有抗原的细胞或磁珠中,样本中的人源抗体会捕获抗原,再加入荧光探针偶联的二抗(图1B),然后可以通过流式细胞仪分析荧光以给出定量数据。 | IgG,IgM,IgA |
流动注射分析(FIA) | 与流式细胞术相似,将样品注射到含有固定抗原的柱子中,样品中的人源抗体会与抗原结合(图1B),再加入荧光探针或酶偶联抗人的二抗进行检测,用比色或荧光法进行检测。 | IgG,IgM,IgA |
ELISA法 | 将一抗固定在固体介质表面上,通常是微孔板,随后会捕获抗原(图1A)或将抗原直接包被在板上(图1B),与来自血清的人源抗体结合,加入酶标记的抗人二抗,最后,添加酶底物,从而得到与分析物浓度成正比的比色读数。 | IgG,IgM,IgA |
聚合酶链反应(PCR) | 该过程类似于ELISA,但是第二抗体是与寡核苷酸缀合。然后通过实时PCR进行DNA扩增和检测。 | IgG,IgM,IgA |
抗人二抗是各类免疫分析中的关键试剂
尽管免疫测定的功能和目的有所不同,但为了在临床上获得准确,可靠数据,开发血清学试剂盒时,高质量试剂至关重要。抗人二抗的质量是开发免疫测定试剂盒时的关键考虑因素,二抗需要谨慎选择,因为它们会结合一种一抗的多个表位上,从而增强了信号的灵敏度和选择性。表2总结了在进行免疫测定选择合适的二抗时需要考虑的多个方面。
表2.在免疫分析中选择合适的二抗时的考虑因素以及我们抗体的特征
考虑因素 | Jackson 二抗 | |
抗体来源 | 人体样品的血清学检测应使用抗人二抗,以最大程度地减少非特异性结合,以最大程度降低背景信号和假阳性。 | 我们可以提供多种来源的抗人二抗,包括羊驼,驴,山羊,小鼠和兔子。 |
产品类别 (完整的IgG还是片段) | 二抗可以是完整的免疫球蛋白(Ig)G,也可以是F(ab')2和Fab片段,完整的IgG分子可适用于大多数检测,而F(ab')2和Fab片段可用于避免与具有Fc受体的活细胞的非特异性结合。 | 我们可以提供完整IgG形式的二抗以及F(ab')2和Fab片段 |
特异性 | 根据所需免疫测定的特异性,可以制备针对整个Ig分子的二抗,以及针对于Fc或F(ab')2结构域特异性的二抗。 | 我们可以提供针对于对整个人源Ig分子的二抗,以及针对于Fc和F(ab')2结构域特异性的二抗。 |
亚型 | 大多数免疫测定均只检测IgG型抗体,这种类型抗体占总血清Ig的?75%,是次级免疫反应的一部分。但是,血清中同时也存在IgM和IgA,而且二抗只对同亚型一抗的具有特异性。 | 我们可以提供对IgG,IgM,IgA,IgG+IgM和IgG+IgM+IgA一种或几种亚型有特异性的二抗。 |
亲和纯化和交叉吸附 | 由于在Ig结构域具有高度的结构保守性,建议对抗体进行亲和纯化并进行交叉血清吸附的,以减少交叉反应的可能性。 | 免疫亲和层析可用于分离亲和纯化的抗体。我们可以选择已进行物种交叉吸附的抗体,交叉吸附相关信息会在对应产品说明括号中提供,表示为“ min X”,“X”为相关物种的缩写。 |
偶联标记 | 二抗通常与分子偶联,例如酶,荧光探针或有色颗粒。免疫测定的检测系统将确定标记物的种类。 | 抗人二抗可以与多种标记物偶联,包括生物素,AP,HRP,荧光基团和胶体金纳米颗粒。 |
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