革兰氏染色(Gram stain)是细菌学比较广泛使用的鉴别染色方法,革兰氏染色的主要步骤是:细菌先经碱性染料结晶紫染色,而后经碘液进行媒染,之后用酒精脱色,在一定条件下有的细菌媒染后的颜色不会脱去,有的可以被脱去。
前者叫做革兰氏阳性菌,后者为革兰氏阴性菌。为方便进一步观察,脱色后再用碱性蕃红进行复染,阳性菌仍为紫色,阴性菌染成红色,这就是革兰氏染色的原理。
其实还有一种方法,能更有效的鉴别与分析活细菌与死细菌,即远慕生物推荐的活细菌染色试剂盒:流动流式细胞术活细菌检测试剂盒 活细菌荧光成像试剂盒。
这款产品的作用原理是:MycoLight™520是一种非荧光酯酶底物,可扩散到革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌中。在细菌细胞内非特异性酯酶水解后,产生绿色荧光产物并在细菌内积累。与常用的酯酶底物CFDA和CFDA-AM相比,该活细菌染色试剂盒可提供更明亮,更稳定的信号,背景更低,染色方案更容易。
用CFDA或MycoLight™活细菌荧光成像试剂盒染色的大肠杆菌的荧光图像。CFDA在成像之前需要洗涤步骤以最小化背景,而使用该试剂盒不需要洗涤(Cat#22409)。MycoLight™520的染色效率远高于CFDA,因为更多的细菌显示出绿色荧光。在染色1小时后,MycoLight™520的信号仍留在细胞中,而CFDA很容易漏出。在每个样品中呈现相同量的细菌,并且在相同的暴露时间下拍摄荧光图像。
使用ACEA NovoCyte流式细胞仪在FITC通道中分析大肠杆菌悬浮液的相对活力。读数(计数(%))获自各种活/死大肠杆菌混合物。通过两个不同的峰可以容易地区分每种混合物中的活的和死的种群。
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