对于细胞培养而言,血清的重要性显而易见。它含有包括生长因子在内的蛋白、氨基酸、脂类、碳水化合物、维生素及其他成份,可以促进贴壁或悬浮细胞的生长和维持。
胎牛血清(FBS)是细胞培养最常用的血清。
随着全球生物学研究的迅猛发展,对血清的需求也越来越多,加上进口运输成本增加等等各种原因,进口血清的价格在国内也是悄悄地蹭蹭地,站到了「不菲」的价位。
由于进口血清价格昂贵,购买渠道不明朗,市场上以次充好,假冒问题等日益放大,所以研究人员所关注的因素有以下几点:
1、 血清供应连续性
2、 血清批次一致性
3、 实验数据的稳定性
4、 价格是否有波动
5、 产品的完整性
注意:
在水浴过程中,血清的平面要完全浸在水中。在融化过程中要慢慢摇动,使血清混匀,但不要产生泡沫!
与 4 ℃ 过夜法相比,三步法为什么对血清更好呢?重点有二!
其一:关系到沉淀出现的几率!
记得吗?血清在融化过程中,瓶子里冰块的底部你会看见亮亮的蛋白丝在下沉,如同蜂蜜溶于水时的亮线,这就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔点高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高级冰淇淋和大棒冰的区别,你懂得!)试想,如果采用 4 ℃ 过夜的方法,1 瓶 500 毫升的血清融化好,大约需要 10 小时左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此时就很容易有一些蛋白饱和析出,(大多是脂蛋白和纤连蛋白),这就是血清融化中产生沉淀的重要原因之一。
采用三步法,只要 2.5 个小时,温和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化过程中可以间断轻轻摇摆瓶子,让蛋白在瓶中混匀。此方法不但节约了时间,而且最大限度减少了血清沉淀出现的几率。
血清融化过程中,蛋白质会比水先融化。冰块底部亮亮的细丝就是融化中的蛋白。
其二:血清在培养细胞中,最重要的是利用它的活性的因子,因此,融化过程中最大限度地保留因子的活性,就变得非常重要。回忆一下,细胞复苏时,要保持细胞的活性,我们是要遵循「快融」原则还是「慢融」原则呢?快融!血清同样如此!三步法需要两个半小时,4 ℃ 过夜需要大约 10 个小时(冰箱一般设 2-8 ℃,所以各实验室融化时间会稍有出入)。哪个速度对保留活性更好?不言而喻!
养细胞不易,选对好血清,更是养好细胞的头等大事,希望以上信息对你有所帮助。
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