质粒小量提取试剂盒常见从1~4mL菌液可以抽提到5~30?g的质粒,纯度高,OD260/OD280比值一般为1.8-2.0之间,质粒可直接用于PCR、酶切、转化测序和体外转录等后续实验。那么在实验过程中常见问题有哪些,下面跟小编一起来看一下。
质粒得率低可能原因及解决办法:
1、菌体未活化,生长效率低,菌量少。需要活化菌种。
2、属于低拷贝质粒,增加菌液的量。
3、SolutionB裂解不充分,室温静置5min。
4、最后洗脱体积不够,洗脱液不少于50?L。
质粒纯度差可能原因:
1、SolutionA未加入RNaseA或加入RNaseA的SolutionA 未4℃保存。
2、加入SolutionB剧烈震荡,使得基因组断裂。
3、加入BufferN操作慢,形成微小沉淀,蛋白质无法被充分漂洗干净。
4、BufferW2未加入无水乙醇。
5、OD260/OD280比值一般在1.8-2.0之间,小于1.8可能有蛋白污染,大于2.0有部分降解或RNA污染。
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