(一)温度
哺乳动物及人源细胞培养的最适温度为35-37V,对低温耐受力比高温强。39℃以上的培养环境细胞容易受损,甚至死亡。不低于0℃时((0-34℃),细胞能生存,但代谢降低、分裂延缓。
(二)气体环境和pH
动物细胞培养需要O2和CO2。O2通量过大对细胞有毒害,一般使用空气中的O2含量就可以。CO2则与维持培养基的pH有关,细胞培养的最佳pH为7.2-7.4,通过缓冲系统和调节CO2含量,可维持正常pH。
开放培养要求5%CO2环境、HEPES(羟乙基哌-嗪乙硫-磺酸)10-50mmol/ml可防止培养基的pH变化。含Earle's缓冲系统的培养基适合于5%CO2的培养条件,Hank's缓冲系统的培养基仅含有0.35g/LNaHCO3,不能用于5%CO2的环境,若放入CO2培养箱,溶液将迅速变酸,使用时应注意。
(三)湿度和光
利用多孔细胞培养板、方瓶、培养皿等开放培养时,相对湿度应控制在95%以上。
动物细胞培养需避光,紫外线或可见光均可造成核黄素、酪氨酸、色氨酸等产生有毒的光产物,抑制细胞生长,降低其贴壁能力。
(四)影响细胞生长的其他因素
细胞接触橡胶用品,收集细胞时离心速度过大,细胞接种密度过低,细胞悬液或细胞培养物中气泡形成等,均对细胞不利,会导致细胞死亡或生长繁殖抑制。
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