稳定转染,即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中,并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。
瞬时转染的表达时间短暂,外源基因导入整合基因组的几率非常低,绝大部分以游离形式存在,不能随细胞分裂而一同复制,导致最后拷贝数被稀释,无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染,多为瞬时转染。
一般如下情况需要构建稳定株:
1) 长期在目的细胞中研究基因功能,通过构建稳定株,可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本,也极大方便实验研究;
2)部分蛋白半衰期极长,瞬时RNA只能干扰表达,无法去除已经表达的目的蛋白,通过构建稳定株可以实现更好的基因干扰效果;
3)瞬转往往会引入极高拷贝数的表达,导致因为人为因素造成实验结果的不精确,构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究;
4)需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的;
5)需要用细胞做动物实验的,比如裸鼠成瘤等,往往需要构建成稳转株。
构建稳定株的方法:
其实用脂质体转染、磷酸钙转染法等理论上是可以构建稳定株的,但这些方法整合入基因组的效率极低,很难成功。而慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组,效率很高,是建立稳定株的最优方式。
构建稳定株的注意点:
稳定株构建是个长期过程,从质粒构建到慢病毒包装,再到细胞感染及后期的筛选,每一步都至关重要,所以建立稳转株花个半年时间,也是常有的事,而且要承担病毒包装不成功,细胞感染效率低等风险。
免疫荧光间接法测抗体法的原理和实验步骤
重组蛋白的特性与使用注意事项
筛选稳定细胞株的两种方法
ELISA试剂盒的检测结果分析
相关产品
豚鼠5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA试剂盒
豚鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒
豚鼠60S核糖体蛋白L17(RPL17)ELISA试剂盒
豚鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)ELISA试剂盒
豚鼠60S核糖体蛋白L36a-样(RPL36AL)ELISA试剂盒
豚鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒
豚鼠6-羟多巴胺(6-OHDA)ELISA试剂盒
豚鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒
豚鼠6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA试剂盒
豚鼠胆碱脂酶(CHE)ELISA试剂盒
豚鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒
豚鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒
豚鼠单胺氧化酶(MAO)ELISA试剂盒
豚鼠8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)ELISA试剂盒
豚鼠催产素(OT)ELISA试剂盒
关注
拨打电话
留言咨询