细胞株若受到细菌、真菌、支原体、或是特定病毒等之污染时,会严重的影响实验的结果。而细菌、真菌等之微生物污染时,较易自培养基等的外观变化察觉。但是若受到支原体之污染时,细胞之外观较无明显变化,但是其污染会造成细胞之生长速率缓慢、细胞产生病变之型态改变等等变化。
各国细胞库支原体污染的统计表,如下:
国家 受支原体污染(%) 报告年度
USA-FDA 15 1993(past 30 years)
USA-ATCC 15-20 1992
Japan-(IFO,RIKEN,JCR 80~30~22 1981 1987-19931998
Germany-DSM 36 1990-1994
Argentina 65 1987
Israel 32 1986-1993
China 95 1990
造成支原体高污染率的原因为:
1.支原体size 0.1~0.8 um,无细胞壁,可透过一般过滤膜(0.22-0.45 um)
2.支原体污染时,没有明显的肉眼或一般光学显微镜可观察到的特征变化
3.过去缺乏简单、快速且可靠的检测方式
4.细胞流通间缺乏品管,造成实验室间的相互污染
5.研究或操作人员忽略污染问题
而支原体污染了来源:
1.已受污染的细胞
2.操作人员的疏失
3.已受污染的培养基、血清
4.操作环境不良、实验器具不洁等
由于支原体为人体口腔中之正常菌丛,实验室之操作人员的污染亦可能为污染源,须十分注意。而万一细胞已受支原体污染时,最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃,以免污染其它洁净的细胞株。但是若是坚持要作去除支原体污染,有以下几种方法,只不过结果会与原始的细胞特性有差异。
去除支原体污染:
1. 抗生素处理:BM-cyclin(Roche),MRA(mycoplasma removal agent,ICN),Ciprofloxcin(Bayer),Enrofloxacin(Bayer)
2. Nucleic acid metabolites:5-bromouracil,Hoechst 33258,bromodeoxyuridine
3. Anti-sera
预防与控制方面可从以下各点加强注意:
G 设备方面:
1.使用已作支原体测试ok之细胞株
2.于另一隔离之区域操作未知是否有支原体污染之细胞
3.使用不添加抗生素的培养基培养细胞
G 检测方面:定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O有否被支原体污染。
G 实验操作人员之无菌观念与无菌操作技术之要求
有关支原体污染之问题与回答:
o 应如何避免细胞污染?
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和支原体。 主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。 严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
o 如果细胞发生微生物污染时, 应如何处理?
直接灭菌后丢弃之。
免疫荧光间接法测抗体法的原理和实验步骤
重组蛋白的特性与使用注意事项
筛选稳定细胞株的两种方法
ELISA试剂盒的检测结果分析
相关产品
豚鼠5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA试剂盒
豚鼠干细胞因子/肥大细胞生长因子(SCF/MGF)ELISA试剂盒
豚鼠60S核糖体蛋白L17(RPL17)ELISA试剂盒
豚鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)ELISA试剂盒
豚鼠60S核糖体蛋白L36a-样(RPL36AL)ELISA试剂盒
豚鼠钙调素(CAM)ELISA试剂盒
豚鼠6-羟多巴胺(6-OHDA)ELISA试剂盒
豚鼠胆囊收缩素/肠促胰酶肽(CCK)ELISA试剂盒
豚鼠6酮前列腺素(6-K-PG)ELISA试剂盒
豚鼠胆碱脂酶(CHE)ELISA试剂盒
豚鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒
豚鼠单核细胞趋化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)ELISA试剂盒
豚鼠单胺氧化酶(MAO)ELISA试剂盒
豚鼠8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)ELISA试剂盒
豚鼠催产素(OT)ELISA试剂盒
关注
拨打电话
留言咨询