细菌冷冻保存实验方法

上海远慕生物科技有限公司

2022/05/09 09:46

实验概要

速冻，是将样品快速用干冰或液氮保存于-70°C或更低的温度中。速冻能够达到和缓慢控速冷冻相同的目的，效果大约为 -10-1000°C/min，但达不到-1°C /分钟。用CoolRack?液速冻样本能够保持样本体积的稳定、组织结构完整、恒定的冻结参数，快速免提样本是能避免丢失或污染的样品。在预冷CoolRack的前提下进行速冻，这能确保传热快。这种方法可以提供优良的标本的完整性和各类分析选择，包括在研究和诊断中蛋白质、DNA和RNA的提取。本实验提供长时间冷冻细菌的常规方法。

主要试剂

细菌样品

冷冻保护剂

TrueCoolTM冷冻管

主要设备

CoolBoxTM CFT30

CoolRack? CFT30

CoolRack?的CF

Cryolabels和/或cryomarkers

ThermalTrayHP平台（可选）

CoolSinkTM BX50（可选）

37℃水浴锅

-80℃冷冻冰箱

实验步骤

细菌样品的准备

遵照细菌的生长和制备实验室的方法。

参照CDC（疾病控制和预防中心）的指导方针，特定病原体利用BSL标准（生物安全等级）。病原体具有传染性，应在一个可控和安全的环境中操作。

细菌冻结

1．一般规则情况下，将制备的样品保持在4°C。

2．将准备好的细菌样品中加入无菌甘油，使得样品中甘油浓度为15-50％V/V。然后取1mL（或所需体积）分装于预先标记的TrueCool冻存管中。为了避免降低滴度，减少滴度将冻存管保持在CoolBox里CoolRackCFT30中，维持4°C。 CoolRackCFT30能降低由于单手开关瓶盖，造成的污染和泄漏事故。

3．当细菌样品在CoolRackCFT30维持4°C时，将 CoolRackCF于干冰上平衡10分钟。

4．将冷冻样品转移到一个储物盒，并放置在-80°C冰箱长期存放。

细菌解冻

1．将冷冻样品从-80℃冰箱中拿出，放置于-12°C 的CoolBoxCFT30冷冻墨盒里，这样可以保持合适的温度和安全的传递样品。

2．将冻存管放置在37℃水浴瓶中，慢慢幌动小瓶，使其冻融。在整个液体完全解冻前，将冻存管从37°C水浴瓶中拿出放在一个已经在冰上平衡过的CoolRackCFT30上。样品准备好可供实验。

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