动物细胞培养基本要求与操作步骤

上海远慕生物科技有限公司

2023/05/30 11:42

细胞培养技术已经成为当今生命科学各领域的基础技术和基本技能，它也是细胞工程、基因工程和生物医学工程的重要研究手段。那我们在实际的动物细胞培养实验中需要注意哪些基本要求呢？

1、实验前准备

实验前必须分门别类地制订操作卡片，如清洗卡、消毒卡、细胞常用液（细胞培养液、BSS液、消化液）配制卡、牛血清检测分装卡、细胞原代和传代操作卡等。各卡片上注明实验所需器材的名称、规格、数量、操作要领和实验注意事项等。实验前应按卡片收集、清点所需用品，一并放入超净台内，这样可避免操作时因物品不全而往返拿取所浩成的污染。同时，根据每个实验的要求，准备好瓶管支架器械消毒盒等。实验器材准数要大于实验使用数，瓶盖数要大于瓶数。这样才能有条不紊地做实验，也减少了忙乱操作所引起的污染。

2、无菌室和操作室消毒

无菌室内每周用乳酸蒸气（或过氧乙酸）加紫外线消毒1~2次。实验前，将实验器材放入超净台内，打开超净台紫外线灯，同时启动超净台风机，40 min后消毒完毕，关闭紫外线灯。这样，超净台内空气被净化，超净台面构成相对无菌的环境。

3、无菌操作要求

①手指不能触及器材使用端。如触及，器材需更换或烧灼后再使用（如瓶口）。

②减少手与器材的接触面，学会手指操作。

③一切操作，如打开或封闭瓶口，安装吸管、注射器等，都要在火焰前方进行。瓶口、吸管、注射器使用前要经过火焰消毒后使用。

④瓶口顺风斜放在支架上。试剂用后立即封闭瓶口。瓶口长时间敞开会增加落菌的机会。

⑤不同的细胞同时操作时，要专管专用，并要勤换吸管，防止扩大污染和交叉污染。

⑥瓶口液滴不能倒回瓶内。液滴用干酒精棉球擦拭，瓶口再经火焰消毒。

⑦操作者动作要准确敏捷，尽量避免空气流动。

4、实验中操作要求

洗手、着装与外科临床要求相同。双手用肥皂洗净后浸泡于消毒液中，并用75%的酒精擦拭。细胞培养用液从冰箱取出，试剂瓶口和外壁经洒精外布擦洗后人超净台，超净台面要用酒精纱布擦拭。超净台上的物品面布局合理，污染废液缸、酒精棉球缸在右侧位，酒精灯在中央位，试剂瓶在左侧位。拆除大包装，点燃洒精灯（95%洒精）、火焰无色或微黄色表示酒精杂质少，酒精燃烧wan全（不能使用废酒精或工业酒精，这类酒精燃烧时产生的化学物质易附着到吸管或其他瓶、皿上，带入培养液中会伤害细胞）。

浸泡75%酒精中的金属器械用台面消毒镊子取出，经无菌干纱布擦拭后，迅速通过火焰（器械不能在火焰中灼烧过长时间），冷却后使用，避免烫伤细胞。细胞培养液、牛血清、酶液的吸管，使用后不能再用火焰消毒，因为吸管中残留的培养液被烧焦碳化，再使用时，会把有害碳化物带入培养液中毒害细胞。操作中手指被污染时，可用酒精纱布或棉球擦拭。在实验过程中，不要面向操作台讲话或咳嗽，避免将唾沫中微生物带入超净台内，污染空气。实验者离开超净台时，立即用肘关节关闭侧窗口，避免无菌室内细菌随空气流入净化操作区。

5、实验后要求

实验完毕，关闭超净台风机和电源，未使用过的器材放入饭盒内，用过的玻璃器材投入清水中浸泡，包装纸叠卷，绳成束分类归人，最后，超净台面用酒精纱布或棉球擦拭，紫外线消毒。

6、注意事项

无菌操作离不开火和酒精，操作中避免事故发生。要用打火机点火。火柴点火时，火星熄灭后投入废缸内（缸内有废酒精棉球）。酒精溅出台面或瓶外壁时，立即擦干；一旦发生着火事故，立即关闭超净台风机，用饭盒、湿布扑灭火焰。

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