质控菌株复苏保存相关问题解答

上海远慕生物科技有限公司

2023/05/31 11:15

微生物实验室如果从事致病菌检测、培养基质控验收、方法验证等相关工作，就应该备有质控菌株。实验室需对使用的质控菌株进行规范性管理，以便有效地、安全地使用，保证实验结果的准确性，今天远慕生物为大家总结了实验室质控菌株复苏保存过程中常见的问题。

1. 菌株保存的是第三代，-80℃保存，再取出来活化的话属于第几代？

答：保存的是第三代复活出来后，如果采用平板或肉汤活化相当于转接了一代，就是第四代了，如果还在瓷珠里的话就还是原来的代数。如果是保存在斜面上，这一支斜面一直就是第三代，如果转接到另一支斜面就是第四代了。传代原则，菌株活化复苏不论以任何形式繁殖了一次就算是传了一代。但如果仅是物理位置的转移没有繁殖就不是传代，需要注意。

2. 菌株传代保存到瓷珠里一定要挑单菌落吗？

答：不一定非挑单菌落，但是一定要挑相同特征的菌落，就是说从同一个菌落纯化出来的，以保证它们的特性完全一致。原则是尽量多挑，宁多勿少。

3. 菌株冷冻保存是-70℃还是-80℃有具体标准规定么？

答：其实是有标准的，《SN/T 2632-2010 微生物菌株常规保藏技术规程》是关于菌株保藏的一个标准，大家可以学习一下，各个保存方式都有介绍，但是瓷珠是比较新兴的保存方式暂时里面还没有收录。

4. 怎样延长质控菌株的保存时间呢？

答：大量的实验证明质控菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的，越接近这种保存条件，菌株的保存时间越长。

5. 怎样纯化质控菌株？

答：纯化就是从TSA上或别的非选择性平板上转挑取单菌落划线再分离出单菌落，这就相当于纯化了。

6. 我们只保存第一代菌株是不是要重新传代保存呢，认证老师会不会认为这是个错误？

答：应该不会，认证老师不会提出这种问题的，不过最好是第一代菌株保存一些、第二代菌株保存一些，使用时工作菌株最好使用第三代菌株，第一代菌株可作为长期保存用。

7. 为何要将第三代作为工作菌株？

答：多传代几次后菌株的活力会明显提高，但最多传代到第五代后就不能用了，因为第五代后菌株虽然不会完全变异，但变异率会明显增加，因此选用第三代作为工作菌株是比较合适的，若使用第一、第二代菌株活力没有那么强。

8. 质控菌株是不是传代超过五代就必须销毁处理？

答：不一定。传代超过五代只是存在菌种变异可能，但如果传代到第六代、第七代……，经过形态、生化特性、DNA特征等验证，性状保持稳定，那么这些五代后的菌还是可以正常使用。

9. 菌种编号意义？

答：以金黄se葡萄球菌CMCC（B）26003为例CMCC为中国医学菌种保藏中心缩写，其它常见菌种保藏中心还包括ATCC（美国标准菌种收藏所）、CICC（工业微生物菌种保藏中心）、FSCC（食品安全菌种保藏中心）；B的意思是细菌，对应还有F（真菌）；26003为CMCC的保藏编号。

10. 同样是金黄se葡萄球菌，ATCC6538与ATCC25923有什么不同？

表明其来源不同，生化特性有也有所不同。比如ATCC6538溶血能力较ATCC25923要强。

11. 使用磁珠保藏管保存质控菌株，加入菌液摇匀后为什么要吸干菌液？

防止剩余菌液冷冻后形成冰晶损伤保存的菌株。

12. TSA斜面一般多少度保存，可以放在冷藏里吗？

2-8℃保存，放在冷藏是可以的；注意弧菌和绿脓杆菌要放到室温20-25℃保存，否则会很快死亡。

13. 复苏冻干质控菌株是否可以采用液体培养基？

答：可以，但建议使用平板培养基复苏冻干菌株。有助于分辨复苏出来菌株是否有污染，同时可初步观察菌落形态以鉴定菌株纯度。使用液体复苏的话只能观察到培养基混浊，无法确定是否有污染。

14. 复苏冻干质控菌株是否可以采用显色培养基？

答：不建议采用显色培养基复苏冻干菌株。冻干菌株复苏需要一个最适生长环境，复苏培养基不能选用选择性培养基或显色培养基，这些培养基里面含有抑菌成分不利于菌株复苏。

15. 产气荚膜梭菌做冻存时是否需要保持厌氧状态？

答：不需要，产气荚膜梭菌虽属厌氧性细菌，但对厌氧程度要求并不太严格，按照一般菌株冻存方法进行冻存即可。

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