WB实验中——很难不爱预制胶！

上海远慕生物科技有限公司

2023/07/25 10:51

相信从事生命科学研究领域的小伙伴对于Western Blot一定不陌生吧，这是一个步骤繁多的常用基础实验，其中电泳过程至关重要，稍有不慎我们就只能对着「微笑线」和「皱眉线」叹气，而质量好的电泳能让目的条带整齐，结果图让人眼前一亮。电泳的支持介质为聚丙烯酰胺凝胶，该凝胶的聚合则由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体在自由基的催化下完成。

丙烯酰胺介质为网状结构，小孔尺寸与生物大分子具有相似的结构，带负电荷的蛋白，在电场的驱动下从电极负极向正极迁移。分子量大的蛋白滞留在上方，小分子蛋白继续迁移，从而分离不同分子量的蛋白。

在实验室中若要自行配制WB所需凝胶时需准备很多试剂和材料，包括：ddH2O，30%丙烯酰胺混合液，1.5M Tris（pH 8.8），1.0M Tris（pH 6.8）,10%SDS，10%过硫酸铵，四甲基二乙胺(TEMED)等。其中丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺单体具有神经毒性，作用具有累积性。APS也有一定毒性，对皮肤粘膜有刺激性和腐蚀性；眼、皮肤接触可引起强烈刺激、疼痛甚至灼伤，长期皮肤接触可引起变应性皮炎；吸入后引起鼻炎、喉炎、气短和咳嗽；口服则会引起腹痛、恶心和呕吐。TEMED具有强神经毒性，对粘膜和上呼吸道组织及皮肤有极大破坏作用，因此配置电泳凝胶必须注意个人防护，戴好各种防护装置，如口罩、手套，并在通风橱中进行，但依然常有很多研究人员因为实验操作不慎而受伤中毒乃至影响到生命安危。

鉴于人们在自行配置中存在误触有毒试剂的风险以及人工配制胶质量的参差不齐，预制胶这个新兴种子选手逐渐走入了大众视野。

预制胶拥有以下优点：

1. 即开即用，无需自行配制所需溶液、灌胶、等胶凝固，节省了科研人员宝贵的时间和精力；

2. 无需接触其中具有积累性神经毒性的试剂，大大降低了实验的安全风险；

3. 性能优秀，分离能力强，分辨率高；

4. 大规模生产，胶与胶之间重复性好，质量稳定，不像手工配置胶那样结果差异大；

5．超长保质期：2-8℃可以稳定保存一年；

随着预制胶的逐渐推广，有些商家更是推出了有如下买点的彩色凝胶试剂盒：

1. 彩色上层胶：可制备红色或绿色上层胶，加样孔清晰易辨，方便上样及区分不同凝胶；

2. 配胶过程短：可快速配置一块或多块彩色PAGE凝胶，无需复杂计算及配置，只需将等体积凝胶溶液及缓冲液混合，并加入少许促凝剂即可，操作简便；

3. 稳定且环保：促凝剂无TEMED成分，避免难闻臭味，4度即可稳定保存。凝胶均匀，弹性好，不易碎，电泳蛋白带型美观；

4. 条带清晰：小分子蛋白条带更清楚可见。

在预制胶里，由于丙烯酰胺已经聚合成了聚丙烯酰胺，不再有毒性，彻底杜绝了丙烯酰胺对实验人员可能造成的人体毒害。在国外，大多数实验室都已开始使用预制胶，这使得蛋白电泳变得简便，检测更加快速，省去了自己配胶的诸多麻烦，实验效率得到显著提高。

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