实验室常用多种缓冲液配置方案

上海远慕生物科技有限公司

2023/10/13 10:01

1、1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度：1 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。

PH值    浓HCl

7.4    约70ml

7.6    约60ml

8.0    约42ml

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

2、10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)

组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

1M Tris－HCl Buffer（PH7.4，7.6，8.0）    100ml

500mM EDTA(PH8.0)    20ml

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。

3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。

4. 室温保存。

3、1.5 M Tris-HCl (pH8.8)

组份浓度：1.5 M Tris-HCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。

4. 将溶液定容至1 L。

5. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

4、3 M 醋酸钠(pH5.2)

组份浓度：3M 醋酸钠

配制量：100ml

配制方法：

1.称量40.8g NaAc·3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解

2.加入冰醋酸调节pH值至5.2

3.加去离子水将溶液定容至100ml

4高温高压灭菌后，室温保存。

5、PBS Buffer

组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4

配制量：1 L

配制方法：

1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。

NaCl    8g

KCl    0.2g

Na2HPO4    1.42g

KH2PO4    0.27g

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后，室温保存。

注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

6、10 M 醋酸铵

组份浓度：10 M 醋酸铵

配制量：100 ml

配制方法：

1. 称量77.1 g醋酸铵置于100～200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。

4. 密封瓶口于室温保存。

注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

7、苯ben酚/lv仿/yi戊醇 (25 : 24 : 1)

配制方法：

1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯ben酚/lv仿/yi戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的lv仿/yi戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

8、10％ (W/V) SDS

组份浓度：10％ (W/V)SDS

配制量：100ml

配制方法：

1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68℃加入溶解

2.滴加浓盐酸调节pH值至7.2

3.将溶液定容至100ml后，室温保存。

9、2 N NaOH

组份浓度：2 N NaOH

配制量：100 ml

配制方法：

1. 量取80 ml去离子水置于100～200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。

2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。

3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。

4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

10、2.5 N HCl

组份浓度：2.5 N HCl

配制量：100 ml

配制方法：

1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N)，均匀混合。

2. 室温保存。

11、5 M NaCl

组份浓度：5 M NaCl

配制量：1 L

配制方法：

1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

12、20％ (W/V) Glucose

组份浓度：20％ (W/V) Glucose

配制量：100 ml

配制方法：

1. 称取20 g Glucose置于100～200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后，搅拌溶解。

2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。

3. 高温高压灭菌后，4℃保存。

13、Solution I(质粒提取用)

组份浓度：25 mM Tris-HCl（pH8.0), 10 mM EDTA, 50 mM Glucose

配制量：1 L

配制方法：

1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。

1M Tris-HCl（PH8.0）    25ml

0.5M EDTA（PH8.0）    20ml

20％Glucose（1.11M）    45ml

dH2O    910ml

2. 高温高压灭菌后，4℃保存。

3. 使用前每50 ml的Solution I中加入2 ml的RNase A（20 mg/ml)。

14、Solution II(质粒提取用)

组份浓度：200mM NaOH，1％(W/V)SDS

配制量：500ml

配制方法：

1.量取下列溶液，置于500ml烧杯中

10％ SDS 50ml

2N NaOH 50ml

2.加灭菌水定容至500ml，充分混匀

3.室温保存，此溶液保存时间最好不要超过一个月

注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌

15、Solution III(质粒提取用)

组份浓度：3 M KOAc, 5 M CH3COOH

配制量：500 ml

配制方法：

1. 称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。

KOAc                     147g

CH3COOH    57.5ml

2. 加入300 ml去离子水后搅拌溶解。

3. 加去离子水将溶液定容至500 ml。

4. 高温高压灭菌后，4℃保存。

16、0.5 M EDTA(pH8.0)

组份浓度：0.5 M EDTA

配制量：1 L

配制方法：

称取186.1 g Na2EDTA·2H2O，置于1 L烧杯中。

2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。

3. 用NaOH调节pH值至8.0（约20 g NaOH)。

注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。

4. 加去离子水将溶液定容至1 L。

5. 适量分成小份后，高温高压灭菌。

6. 室温保存。

17、1 M DTT

组份浓度：1 M DTT

配制量：20 ml

配制方法：

1. 称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的0.01 M NaOAc（pH5.2)，溶解后使用0.22 mm滤器过滤除菌。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

18、10 mM ATP

组份浓度：10 mM ATP

配制量：20 ml

配制方法：

1. 称取121 mg Na2ATP·3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。

2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl（pH8.0)，搅拌溶解。

3. 适量分成小份后，-20℃保存。

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