大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒说明书

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品牌: 远慕
规格: 48t/96t
货号: ym-r00189
CAS号: 电询
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产品详情

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中文名:大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒
别名:大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA Kit
货号:fk-m0062
供应商:上海樊克
规格:48t/96t
保存:2-8℃
有效期:6个月
特点:灵敏性高、特异性强、重复性好。
使用范围:仅供科研使用,不得用于临床。
产品用途:用于测定人血清,血浆,组织及相关液体样本中的含量或活性。
检测种属:大小鼠,人,豚鼠,兔子,猪,犬,牛羊,鸡鸭ELISA试剂盒等种属。

大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒说明书 本试剂盒样本处理及要求:

1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。


大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒说明书 本试剂盒实验原理:
超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内一种重要的超氧阴离子自由基清除剂,分为CU,Zn-SOD、Fe-SOD和Mn-SOD3类,在生物界分布较广,其主要作用是能专一地清除生物氧化中产生的超氧阴离子自由基(O2-.),有助于减少和阻止脂质的过氧化反应、延缓机体衰老。

大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒基本原理有三条:
1.抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;

2.抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性; 

3.酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。



大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA检测试剂盒操作注意事项:
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。

大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA检测试剂盒操作步骤:
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断:
绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

ELISA试剂盒性能:
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:最低检测浓度小于(参考说明书)
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

 

大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒使用优点:ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白,包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。
■灵敏,准确和一致的性能
■用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证
■在半天内可完成的现成,方便的检测

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