人垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒免费代测

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    中文名：人垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）ELISA试剂盒

    别名：人垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）ELISA Kit

    供应商：上海远慕

    规格：48t/96t

    保存：2-8℃

    有效期：6个月

    范围：本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床。

    ELISA试剂盒种属：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。

    检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

    产品用途：用于测定人血清，血浆，组织及相关液体样本中的含量或活性。

   

    人垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）ELISA试剂盒免费代测 本试剂盒试剂盒组成及试剂配制：

    1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。

    2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。

    3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

    4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶

    5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

    6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

    7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

    8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

    9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

    10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

    人垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）ELISA试剂盒免费代测 本试剂盒液体类标本：

    包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

    1）血清：

    室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    2）血浆：

    应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    3）尿液：

    用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

    4）细胞培养上清：

    检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并 放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

    5）组织标本：

    切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

    人垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）ELISA试剂盒的若干特点：

    专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。

    灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。

    样品易保存：经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定，因此有利于样品的保存。

    试剂的准备：

    1. 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：

    500pg/ml（6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul

    250pg/ml（5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液

    125pg/ml（4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液

    62.5pg/ml（3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液

    31.2pg/ml（2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液

    15.6pg/ml（1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液

    0pg/ml （空白对照） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul

    2. 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。

    试剂盒性能：

    1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

    2. 特异性：不与其它细胞因子反应。

    3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

    安全性：

    1. 避免直接接触终止液和底物A、B，一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

    2. 实难中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

    3. 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

   

    人垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）ELISA试剂盒操作步骤：

    1. 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

    2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

    3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

    4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

    5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

    6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

    7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

    8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

    9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

    人垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）ELISA试剂盒注意事项：

    1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

    2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

    3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

    4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

    5.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

    6.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

    7.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

    8.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。