人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA试剂盒说明书

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中文名：人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA试剂盒

别名：人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA Kit

供应商：上海远慕

规格：48t/96t

保存：2-8℃

有效期：6个月

特点：灵敏性高、特异性强、重复性好。

使用范围：仅供科研使用,不得用于临床。

产品用途：用于测定人血清,血浆,组织及相关液体样本中的含量或活性。

检测种属：大小鼠,人,豚鼠,兔子,猪,犬,牛羊,鸡鸭ELISA试剂盒等种属。

检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。

ELISA试剂盒准备：

试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

1. 标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。

2. 20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA检测试剂盒双抗体夹心法操作方法：

1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。

2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。

3. 加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。

4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。

5. 终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA试剂盒性能性点：

1.准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.灵敏度：最低检测浓度小于10pg/ml。

3.特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA试剂盒说明书组成及试剂配制：
1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96孔）。
2. 标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10. 终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA试剂盒注意事项：

1.  试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2.  实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3.  不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4.  使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5.  使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

6.  洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7.  底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8.  加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA检测试剂盒技术原理：

（1）抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

（2）结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

（3）酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

（4）受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

（5）此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

（6）加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

人主要组织相容性复合体Ⅰ类（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA试剂盒说明书使用优点：ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白，包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。
1.灵敏，准确和一致的性能
2.用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证
3.在半天内可完成的现成，方便的检测

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