小鼠胰岛素（INS）ELISA试剂盒组织结构

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中文名：小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒
别名：小鼠胰岛素(INS)ELISA Kit
供应商：上海远慕
规格：48t/96t
有效期：6个月
库存状态：现货供应
保 存：2-8℃,避光保存
适用范围：仅用于科研实验，禁用于临床
ELISA试剂盒种属：人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔子、猪犬、牛羊、鸡鸭、植物ELISA试剂盒等。
试剂盒检测目的：用于测定血清，血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本。
性能:敏感性高，特异性强，重复性。
检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法
用途：用于测定血清，血浆及相关液体样本中相关含量或活性。
预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-52含量。

小鼠胰岛素(INS)ELISA检测试剂盒样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒性能优点：
专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。

灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。

样品易保存：经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定，因此有利于样品的保存。

小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒组成及试剂配制：
1、酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

小鼠胰岛素(INS)ELISA检测试剂盒操作步骤：
1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。
2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。
3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。
4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。
5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。
6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。
7、温育：重复4的操作。
8、洗板：重复5的操作。
9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。
10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。
12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒组织结构：
1、 血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心23分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心60分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液：1000×g离心32分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心33分钟，取上清液。

小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒使用优点：ELISA试剂盒可特异性定量测定疾病相关蛋白，包括细胞因子、趋化因子、β淀粉样蛋白与信号转导靶标。
1.灵敏，准确和一致的性能
2.用血清、血浆、组织培养上清或裂解产物进行过验证
3.在半天内可完成的现成，方便的检测

小鼠胰岛素(INS)ELISA试剂盒组织结构注意事项：
（1）待检血清样品数量过多时，应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后，再统一将血清样品加入酶标板中，使反应时间一致。
（2）试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。
（3）底物液和终止液对皮肤有刺激性，注意防护。
（4）底物液不要暴露于强光和任何氧化剂；使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。
（5）所有试剂应在2～8℃存放；使用前恢复到室温，使用后放回2～8℃。
（6）注意防止试剂盒组分受到污染。
（7）不要使用超过有效期的试剂，不同批次试剂盒的组分不要混用。
（8）操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。

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