供货周期: | 现货 |
品牌: | 远慕 |
型号: | 参考说明书 |
货号: | ym-r002587 |
CAS号: | 电询 |
快速过滤超大量质粒提取试剂盒说明书
上海远慕生物专业供应美国Omega系列产品,包含有:质粒中量提取试剂盒,质粒高纯(高性能)小量提取试剂盒,无内毒素小量质粒提取试剂盒 I/II,M-13单链DNA小提/大提/96孔板提取试剂盒,磁珠质粒超大量提取试剂盒,磁珠质粒超大量提取试剂盒,琼脂糖凝胶回收试剂盒,胶回收/PCR纯化试剂盒,聚丙烯酰胺凝胶RNA纯化试剂盒,专业经营ELISA试剂盒,标准品对照品,动物血清血浆,培养基,抗体,化学试剂,生化试剂,溶液 ,染色液 ,缓冲剂,通用试剂,蛋白质,细胞株,生物分子,实验耗材,其他实验试剂等,品种齐全,有进口品牌及国产品牌,欢迎来电订购!
名称:快速过滤超大量质粒提取试剂盒
品牌:Omega
供应商:上海远慕
英文名/型号:Fastfilter Plasmid Mega Kit(2)
英文名/型号:Fastfilter Plasmid Mega Kit(5)
英文名/型号:Fastfilter Plasmid Mega Kit(20)
用途:从200-500ml菌中提取2.5mg质粒
快速过滤超大量质粒提取试剂盒特性与优点:
安全-无酚氯仿等危险的有机物抽提
可靠-操作简单,每次都能获得理想的效果
快速-可在40分钟内完成一次抽提工作
方便-去除SDS沉淀勿需离心步骤
快速过滤超大量质粒提取试剂盒操作步骤:
第一次使用前请先在漂洗液W2瓶中加入与W2相同体积的无水乙醇!将RNaseA全部加入溶液Ⅰ中,混匀,每次使用后置于2-8℃保存。将溶液Ⅲ放在冰上预冷。
1.取100-200毫升过夜培养的菌液,6000g,离心5-10分钟,弃上清,收集菌体,尽可能的倒干上清。 处理超过50毫升菌液可以离心弃上清后,在同一个50ml管内加入更多的菌液,重复步骤1,直到收集到足够的菌体。
2.用5ml溶液Ⅰ重悬菌体沉淀,移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。 如果有未彻底混匀的菌块,会影响裂解,导致提取量和纯度偏低。
3.加5ml的溶液Ⅱ,温和地上下翻转4-7次使菌体充分裂解,室温放置4分钟。 温和地混合,不要剧烈震荡,以免基因组DNA剪切断裂!所用时不应超过5分钟!以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠,如果菌体少,很快清亮粘稠后就可以做下一步,不是一定要准确的5分钟。如果未变得清亮,可能由于菌体过多,裂解不彻底,应减少菌体量。
4.加7ml溶液Ⅲ,立即温和地上下翻转4-7次,充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。冰上静置10钟,4℃,至少5000g离心10分钟(加大离心力可相应缩短离心时间),小心取上清,避免吸取到漂浮白色沉淀。加入溶液Ⅲ后应该立即混匀,以免产生SDS的局部沉淀,如果上清中还有微小白色沉淀,可再次离心后取上清。
5.可选步骤:4℃,5000g再次离心10分钟,小心取上清。
6.将上一步所得上清液加入吸附柱AC中(吸附柱放入收集管中),静置2分钟,5000g离心3分钟(为了保护膜最好慢启动),倒掉收集管中的废液。如果上清体积超过20ml,可以分多次过柱。
7.加入10ml漂洗液W1,5000g离心3分钟,弃掉废液。
8.加入12ml漂洗液W2(请先检查是否已加入无水乙醇!),5000g离心3分钟(为了保护膜最好慢启动),弃掉废液。
9.重复操作步骤8一次。
10.将吸附柱AC放回空收集管中,最高速(最好大于8,000g)离心5-10分钟以干燥膜基质残留乙 醇,用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇,室温或者烘箱晾干几分钟。 该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇,残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率,降低质粒产量。如果洗脱产量低,则必须加做步骤11。
11.可选步骤:选择以下两种方法干燥柱子: a.取下柱子放置于真空容器中,密封真空容器,提供真空15分钟;b.将柱子放置于65℃真空干燥箱或烘箱中,放置10-15分钟。
12.取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加1.5ml洗脱缓冲液EB(洗脱 缓冲液事先在65-70℃水浴中预热),室温放置2分钟,5000g离心3分钟。如果需要较多量质粒,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心2分钟。 洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要质粒浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于1ml,体积过小降低质粒洗脱效率,减少质粒产量。
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标签:快速过滤超大量质粒提取试剂盒 质粒大量提取试剂盒 质粒提取试剂盒
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