大肠杆菌感受态细胞的制备实验检测仪器_检测方案

方案摘要

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实验原理: 带有外源DNA 的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着细胞的大量复制、繁殖，才能够有机会获得纯的重组质粒DNA，该过程称之为转化过程。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2，RuCl 等化学试剂）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，能容许外源DNA 的载体分子通过。

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配置单

方案详情

1、从37℃培养16-20 h的平板中挑取一个单菌落(直径2-3 mm)，转到一个含有100 ml LB或SOB培养基的1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养3 h。一般经验，1 OD₆₀₀约含有大肠杆菌DH5α 10⁹ 个/mL。

2、将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的50 ml聚丙烯管中，在冰上放置10 min，使培养物冷却至0℃。

3、于4℃用Sorvall GS3特头（或与之相当的转头）以4 100 r/min离心10 min，以回收细胞。

4、倒出培养液，将管倒置1 min以使最hou的痕量培养液流尽。

5、每50 ml初始培养液用30 ml预冷的0.1 mol/LCaCl₂-MgCl₂溶液(80 mmol/L MgCl_2，20 mmol/L CaCl₂)重悬每份细胞沉淀。

6、于4℃用Sorvall GS3转头（或与之相当的转头）以41 00 r/min离心10 min，以回收细胞。

7、倒出培养液，将管倒置1 min以使最hou的痕量培养液流尽。

8、每50 ml初始培养物用2 ml用冰预冷的0.1 mol/L CaCl₂(或TFB)重悬每份细胞沉淀。

9、此时，可以用新鲜制备的感受态细胞直接做转化实验，也可以将细胞冻存于- 70℃。

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文献贡献者

上海远慕生物科技有限公司

银牌会员丨第11年

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