方案摘要
方案下载应用领域 | 医疗/卫生 |
检测样本 | 上皮脱落细胞 |
检测项目 | |
参考标准 | 流式细胞仪检测细胞凋亡实验, |
实验原理: 主要根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变,包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等进行检测。
流式细胞仪检测细胞凋亡可应用于:(1)鉴定细胞凋亡形态;(2)准确的进行凋亡细胞的计数;(3)进行特异的定性分析和定量分析。
实验原理:
主要根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变,包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等进行检测。
实验材料: 细胞
试剂、试剂盒:PBS PI 蒸馏水 乙醇
仪器、耗材:棕色瓶 400目筛网 流式细胞仪
实验步骤:
一、收集细胞
收集细胞{数目约(1~ 5)x106个/mL},500~ 1 000 r/min离心5 min,弃去培养液。
二、细胞洗涤
3 ml PBS洗涤1次。
三、乙醇固定
离心去PBS,加入冰预冷的70%的乙醇固定,4℃,1-2小时。
四、细胞重悬
离心弃去固定液,3 mlPBS重悬5 min。
五、细胞过滤
400目的筛网过滤1次,500-1000 r/min离心5 min,弃去PBS。
六、染色
用1 ml PI染液染色,4℃避光30 min。
七、流式细胞仪检测
PI用氩离子激发荧光,激光光波波长为488 nm,发射光波波长大于630 nm,产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。
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