方案摘要
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在被检标本中,常混杂有多种细菌,平板划线分离法可使这多种细菌在培养基表面分散生长,各自形成菌落,以便根据菌落的形态及特征,挑选单个菌落进行纯培养。
(一)平板划线分离法
在被检标本中,常混杂有多种细菌,平板划线分离法可使这多种细菌在培养基表面分散生长,各自形成菌落,以便根据菌落的形态及特征,挑选单个菌落进行纯培养。常用的平板划线分离法有以下两种:
1.连续划线分离法 此法主要用于杂菌不多的标本。用接种环取标本少许,于平板1/5处密集涂布,然后来回作曲线连续划线接种,线与线间有一定距离,划满平板为止。
2.分区划线分离法 本法适用于杂菌量较多的标本。先将标本均匀涂布于平板表面边缘一小区(第一区)内,约占平板1/5面积,再在二、三、……区依次连续划线。每划完一个区,均将接种环灭菌一次。每一区的划线均接触上一区的接种线2~3次,使菌量逐渐减少,以获得单个菌落。
(二)斜面接种法
该法主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。用灭菌的接种环取单个菌落或少许细菌,从培养基斜面底部向上划一条直线,然后从底部向上作连续曲线划线,一直划到斜面顶端。
(三)液体接种法
多用于一些液体生化试验管的接种。用灭菌接种环取菌少许,在试管内壁与液面交接处的管壁上轻轻研磨,使细菌混合于培养液中。
(四)穿刺接种法
此法主要用于半固体培养基、明胶及双糖管的接种。用接种针取细菌少许,从半固体培养基中央,平行于管壁垂直刺入,接近管底但不可接触管底,然后接种针沿原路退出。
(五)倾注平板法
测定牛乳、饮水和尿液等标本细菌数时常用此方法。将标本经适当稀释后,取一定量加入已灭菌的平皿内,倾入已溶化并冷却至45℃左右的定量培养基,混匀,待凝固后倒置、培养。根据培养基内的菌落数和稀释倍数,即可计算出标本的细菌数。
(六)涂布接种法
常用于纸片法药物敏感性测定,也可用于被检标本中的细菌计数。加定量的被检菌液于琼脂平板表面,然后用灭菌的L型玻璃棒反复涂布几次,使被检物均匀分布在琼脂表面,然后贴上药敏纸片培养,或直接培养观察结果。
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