方案摘要
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称重: 根据培养基配方的比例,将牛肉提取物,蛋白胨和NaCl准确称入烧杯中。牛肉酱通常用玻璃棒挑出,在小烧杯或观察杯中称重,溶于热水,然后倒入烧杯中。也可以将其放在称量纸上,称量后直接放入水中。此时,如果将其稍加加热,牛肉糊将与称量纸分离,然后立即将纸页移开。蛋白胨吸湿性强,称重时移动迅速。另外,在混合药物时,应严格防止药物混合。羊角面包用于一种药物,或在服用一种药物后,将其洗涤并干燥,然后称重另一种药物。不要在瓶子上盖错盖子。
称重:
根据培养基配方的比例,将牛肉提取物,蛋白胨和NaCl准确称入烧杯中。牛肉酱通常用玻璃棒挑出,在小烧杯或观察杯中称重,溶于热水,然后倒入烧杯中。也可以将其放在称量纸上,称量后直接放入水中。此时,如果将其稍加加热,牛肉糊将与称量纸分离,然后立即将纸页移开。蛋白胨吸湿性强,称重时移动迅速。另外,在混合药物时,应严格防止药物混合。羊角面包用于一种药物,或在服用一种药物后,将其洗涤并干燥,然后称重另一种药物。不要在瓶子上盖错盖子。
融化:
在上述烧杯中,可以先添加少于所需量的水,用玻璃棒充分搅拌,然后在石棉网上加热使其溶解。药物完全溶解后,加水至所需总体积。如果准备了固体培养基,则将称量的琼脂放入溶解的药物中,然后加热使其溶解。在琼脂溶解过程中,需要搅拌以防止琼脂糊破坏烧杯。最后补上丢失的水。
PH调整:
在调节pH值之前,首先要用精密pH试纸测量培养基的原始pH值。如果pH呈酸性,则用滴管将1mol / L NaOH滴加到培养基中,边搅拌边添加,并随时用pH试纸测量其pH值直至pH达到7.6。否则,请使用1mol / L HCl进行调整。请注意,不应将pH值调节得太远,以免发生回调,否则会影响介质中离子的浓度。
对于某些需要更准确pH值的微生物,可以使用酸度计调节pH值(有关用法,请参阅相关说明)。
过滤器:
趁热时,用滤纸或多层纱布过滤以利于观察结果。如果没有特殊要求,则可以省略此步骤(此实验中无需过滤)。
包装:
根据实验要求,所制备的培养基可以分为试管或锥形瓶。
在填充过程中,请注意不要让培养基粘附在试管或瓶子的嘴上,以免污染棉塞并造成污染。
(1)液体包装和包装的高度优选为试管的高度的约1/4。
(2)用于固体分装和分装的试管不得超过试管高度的1/5。灭菌后,应将其制成斜坡。分开的锥形瓶的体积不应超过锥形瓶的一半。
(3)半固体分装试管通常适合试管高度的1/3,并在灭菌后垂直凝结。
加塞:
填充培养基后,将棉塞放在试管或三角瓶的嘴上,以防止外部微生物进入培养基并造成污染,并确保良好的通风性能(将棉塞的方法固定在背面此实验)。
绷带:
堵塞后,将所有试管用麻绳绑起来,然后在卫生棉条上缠上一层牛皮纸,以防止灭菌过程中的冷凝水弄湿卫生棉条。使用标记指示介质名称,组和日期。塞子装满牛皮纸后,用麻绳将绳子包裹成松散的结。使用时很容易解开它。另外,使用标记指示介质名称,组和日期。
杀菌:
通过在121.3℃下以1.05kg / cm 2(15lb / in 2)高压灭菌20分钟,将上述培养基灭菌。如果由于特殊情况不能及时消毒,应将其放在冰箱中暂时存放。
搁置斜面:
将灭菌后的试管培养基冷却至约50℃,将试管的棉塞端置于玻璃棒上,倾斜面的长度优选为试验总长度的一半以下。
无菌检查:
将灭菌后的培养基放入37℃的温室中24-48小时,以检查灭菌是否完成。
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