方案摘要
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微生物培养基用来实验室培养细菌、真菌等微生物,通常有固体和液体两种类型。液体培养基又通常称为肉汤,而固体培养基通常称之为琼脂培养基,这是因为固体培养基当中通常添加了琼脂成分,起到凝固培养基的作用。
微生物培养基用来实验室培养细菌、真菌等微生物,通常有固体和液体两种类型。液体培养基又通常称为肉汤,而固体培养基通常称之为琼脂培养基,这是因为固体培养基当中通常添加了琼脂成分,起到凝固培养基的作用。
琼脂:又叫琼胶,为无色、无固定形状的固体,溶于热水。琼脂最有用的特性是它的凝点和熔点之间的温度相差很大。它在水中需加热至95℃时才开始熔化,熔化后的溶液温度需降到40℃时才开始凝固。基于琼脂的这些特性,其在生物实验室中有着广泛的应用,例如制作微生物培养基的凝固剂,作为琼脂糖凝胶电泳时的电泳支持介质等等。
但是配置培养基时,培养基通常会出现配置之后呈现流体,半流体不能凝固的状态,难以凝固,以下是一些常见的培养基无法正常凝固的原因。
1.琼脂添加量较少
自行配置培养基时,需要严格按照培养基配置的配方比例进行,固体培养基配置时通常保证每升添加12g以上的琼脂量。配置半固体培养基时,通常会减少琼脂额用量,所以如果琼脂用量少的话,会影响培养基的凝固,无法形成固体。
2.使用劣质琼脂
同上,因为琼脂是影响培养基凝固的关键,所以使用质量不好的、过期的、变质的琼脂,同样会影响培养基的凝固效果。
3.pH值不准确
这点是很多人配置培养基过程中会忽略的因素。配置的培养基最好保持在5-10的pH区间,pH过低时,会导致培养基酸化,影响琼脂的凝固效果。通常来说,按照正常流程进行配置都能保证pH在正常范围内,但是仍然有一些因素可能导致pH变化,值得注意。
例如,使用的水pH过低,所以尽量使用桶装水较好。另外,灭菌前后去测量的话,也会发现培养基pH有降低的情况,这主要是因为在长时间的高温情况下,会导致培养基内营养物质分解,成分改变,从而影响pH;因此不同培养基因为成分有所差异,灭菌前后pH变化也并不一致,另外含有缓冲剂的培养基其pH变化会较小。因此通常建议配置培养基时,先把培养基pH值调到比原来略高0.4-0.5的值。
4.培养基未完全溶解
例如在配置时直接使用冷水进行溶解,琼脂只溶于热水而无法溶于冷水,使用冷水进行溶解不能使琼脂完全溶解和分散均匀。
使用热水进行溶解,但也并未煮沸,一定要煮沸,保证完全溶解之后再去分装灭菌。灭菌结束之后倒平板的时候,也建议一定要先进行摇匀再倒板,否则可能会出现前面倒的板子凝固不好,而后面的板子才能凝固的情况。
5.加热过度
加热过度一般是指灭菌温度过高,或者时间过长,或者反复多次进行加热溶解。先前说过灭菌过后,培养基内成分会发生一些变化,特别是在过度的加热过后,可能会影响培养基的凝固,同时因为营养成分较大的变化,对实验结果也会产生影响,因此不建议反复过度的加热和灭菌。
6.环境温度
环境本身温度过高,例如在一些闷热的空间,或者较高温度的夏天时,培养基不能很好的凝固。因此建议可以适当的提高琼脂所使用的的比例,以更好地使培养基凝固。
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