方案摘要
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培养基的颜色主要来自酚红,酚红指示颜色非常灵敏,pH值范围为6-8,颜色由黄变为紫红。为了培养方便,能让我们直观地感觉培养液的状况,加入酚红后,如果培养液偏酸,就显示偏黄色,偏碱性则会显示偏紫色。一般来说,污染细菌或者长时间不换液时,培养基变成黄色,主要是因为细菌和细胞过度增长,产生了酸性物质。
培养基的颜色主要来自酚红,酚红指示颜色非常灵敏,pH值范围为6-8,颜色由黄变为紫红。为了培养方便,能让我们直观地感觉培养液的状况,加入酚红后,如果培养液偏酸,就显示偏黄色,偏碱性则会显示偏紫色。一般来说,污染细菌或者长时间不换液时,培养基变成黄色,主要是因为细菌和细胞过度增长,产生了酸性物质。
培养基迅速变黄原因:
1.有可能是二氧化碳缓冲的,培养基PH值的变化会造成培养基颜色的变化,有些细胞的培养基也会变黄。
2.血清浓度:大于15%培养液即偏黄。
3.如果怀疑污染,最可能的是支原体,一般在培养两周左右细胞基本全部死亡。
解决方法:
1.细胞培养液中一定要加HEPES,作用是稳定液体的PH。HEPES的化学全称位呱嗪乙硫磺酸(N’-a-hydroxythylpiperazine-N’- ethanesulfanic acid )。对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂,能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L,一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。
2.以培养基颜色的变化作为换液的指标,是不够,但很实用。因为培养液中有指示剂酚红存在,故液体颜色的变化可间接提示细胞生长的状态。细胞生长旺盛,产酸,液体呈黄色;反之,液体会呈紫红色。
3.在观察细胞时,液体ph变化大,会对细胞产生伤害,对细胞生长不利。
4.是否所有的细胞培养基均适用同样的CO2浓度?
其实不然,CO2浓度的选择取决于NaHCO3浓度。CO2和溶液中的-HCO3形成缓冲体系,使得整个培养体系的pH值维持在弱碱性(7左右),这也是哺乳动物细胞生长的最适pH值。当培养基长时间暴露在空气中是,-HCO3会迅速分解,pH值快速升高,视觉观感上即是从红变紫。当再次将培养基放到细胞培养箱中后,在CO2的作用下,又会缓慢地从紫变回红色。
不同的细胞培养基的NaHCO3浓度不一样,使用不用的细胞培养基应选择与之对应的CO2浓度:
NaHCO3 (g/L) 浓度<1.5时,所需CO2浓度为4%;
NaHCO3 (g/L) 浓度处于1.5-2.2时,所需CO2浓度为5%;
NaHCO3 (g/L) 浓度处于2.2-3.4时,所需CO2浓度为7%;
NaHCO3 (g/L) >3.5时,所需CO2浓度为10%。
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