方案摘要
方案下载应用领域 | 生物产业 |
检测样本 | 其他 |
检测项目 | |
参考标准 | / |
酶联免疫吸附测定(ELISA)因其具有敏感性高、特异性强等优点,被广泛应用于科研和临床检测中的各种抗原和抗体的测定。 一般来说,ELISA可分为四大类:直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争抑制ELISA。其他的ELISA基本上都隶属于这四类ELISA或由这四类ELISA组合衍生而来。
酶联免疫吸附测定(ELISA)因其具有敏感性高、特异性强等优点,被广泛应用于科研和临床检测中的各种抗原和抗体的测定。 一般来说,ELISA可分为四大类:直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争抑制ELISA。其他的ELISA基本上都隶属于这四类ELISA或由这四类ELISA组合衍生而来。
尽管不同类型的ELISA实验原理及具体步骤不尽相同,其中存在的许多问题却是相同或类似的,应关注的细节也大致相同。这些问题/细节对检测效果影响较大,或者可能导致假阳性或假阴性的结果。因此要想得到比较真实、满意的实验数据,并不是很容易的事情。
ELISA实验假阳性、本底高甚至花板的原因与解决方法
序号 | 原因 | 解决方法 |
1 | 试剂过期 | 重新购置在有效期内的试剂 |
2 | 加样时污染 | 注意更换吸头,尽量避免污染。 |
3 | 加酶时污染 | 对先加样后加酶的操作,加酶时要注意吸头不要接触标本,造成污染。当可能造成污染时,一定要更换吸头,切记侥幸心理。 |
4 | 恒温箱温度过高 | 注意控制恒温箱温度,尽可能让其稳定在37±0.5℃。 |
5 | 整个操作时间过长,造成反应时间不同(第一孔与最后一孔反应时间相差悬殊)。环境温度高时更明显。 | 在尽可能短的时间内完成操作。尽量不要堆积多块板子操作(尤其是手工操作时)。 |
6 | 洗涤液稀释倍数过高 | 按照要求倍数稀释洗涤液 |
7 | 洗板次数不够 | 按要求操作,不可任意减少洗板次数。 |
8 | 洗板时浸泡时间不够 | 按要求操作,或适当延长浸泡时间。 |
9 | 手工洗板方式不正确 | 洗板时垂直加入洗液,保证一定的冲击力;洗液要注满板孔,并保证30-60秒的浸泡时间。 |
10 | 酶被污染 | 防止组分的污染。如使用容器,注意容器的清洁。 |
11 | 显色液B液被污染 | |
12 | 显色完后没有或没有及时终止反应。 | 显色完应立即终止反应。 |
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