ELISA实验假阳性、本底高甚至花板的原因与解决方法检测仪器_检测方案

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酶联免疫吸附测定（ELISA）因其具有敏感性高、特异性强等优点，被广泛应用于科研和临床检测中的各种抗原和抗体的测定。一般来说，ELISA可分为四大类：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争抑制ELISA。其他的ELISA基本上都隶属于这四类ELISA或由这四类ELISA组合衍生而来。

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酶联免疫吸附测定（ELISA）因其具有敏感性高、特异性强等优点，被广泛应用于科研和临床检测中的各种抗原和抗体的测定。一般来说，ELISA可分为四大类：直接ELISA、间接ELISA、夹心ELISA、竞争抑制ELISA。其他的ELISA基本上都隶属于这四类ELISA或由这四类ELISA组合衍生而来。

尽管不同类型的ELISA实验原理及具体步骤不尽相同，其中存在的许多问题却是相同或类似的，应关注的细节也大致相同。这些问题/细节对检测效果影响较大，或者可能导致假阳性或假阴性的结果。因此要想得到比较真实、满意的实验数据，并不是很容易的事情。

ELISA实验假阳性、本底高甚至花板的原因与解决方法

序号	原因	解决方法
1	试剂过期	重新购置在有效期内的试剂
2	加样时污染	注意更换吸头，尽量避免污染。
3	加酶时污染	对先加样后加酶的操作，加酶时要注意吸头不要接触标本，造成污染。当可能造成污染时，一定要更换吸头，切记侥幸心理。
4	恒温箱温度过高	注意控制恒温箱温度，尽可能让其稳定在37±0.5℃。
5	整个操作时间过长，造成反应时间不同（第一孔与最后一孔反应时间相差悬殊）。环境温度高时更明显。	在尽可能短的时间内完成操作。尽量不要堆积多块板子操作（尤其是手工操作时）。
6	洗涤液稀释倍数过高	按照要求倍数稀释洗涤液
7	洗板次数不够	按要求操作，不可任意减少洗板次数。
8	洗板时浸泡时间不够	按要求操作，或适当延长浸泡时间。
9	手工洗板方式不正确	洗板时垂直加入洗液，保证一定的冲击力；洗液要注满板孔，并保证30-60秒的浸泡时间。
10	酶被污染	防止组分的污染。如使用容器，注意容器的清洁。
11	显色液B液被污染	防止组分的污染。如使用容器，注意容器的清洁。
12	显色完后没有或没有及时终止反应。	显色完应立即终止反应。

文献贡献者

上海远慕生物科技有限公司

银牌会员丨第11年

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