PCR反应扩增曲线讲解

上海抚生实业有限公司

在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，使每一个循环变得“可见”，最后通过循环阈值( Cycle threshold，Ct) 和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。

PCR扩增过程中，每一轮循环均检测一次荧光信号的强度。随着反应循环次数的不断增加，所扩增的目的基因片段呈指数规律增长，反应中产生的荧光信号强度与PCR产物的数量呈正比。仪器实时检测和采集的荧光信号，随着时间和循环数的不断增加，产生一条反映实时荧光信号强度变化的曲线，称为扩增曲线。

扩增曲线分为三个阶段：基线期、指数扩增期、平台期

1.Ct值：特指在PCR扩增过程中，扩增产物的荧光信号达到所设置的阈值时反应所经历的扩增循环次数。起始模板DNA量越多，荧光信号达到阈值的循环数越少，即Ct值越小。反之亦然。

当Ct值接近30时，就说明起始模板量太少。

2. 荧光本底信号（baseline）：指前15个循环所产生的荧光信号，监测器采集到的真正信号一般指超过阈值的荧光信号。本底信号变化不大，因此接近一条直线，被称作基线。

3. 荧光阈值特指前3-15个循环所产生的荧光信号的标准差的10倍，一般认为当荧光信号达到这个值时，反应刚刚进入指数期。

4.平台期：PCR扩增时所加的底物、dNTP等是一定的,当反应开始时,反应物充足,扩增得到的产物是持续增加的,但随着底物消耗，就不能继续发生扩增了

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