| 供货周期： | 现货 |
| 品牌： | 抚生 |
| 规格： | 1×106 |
| 货号： | A01X1063 |
| CAS号： |
商品属性：
产品名称 | J774A.1小鼠单核巨噬细胞 | 鉴定 | STR鉴定 |
种属 | 小鼠 | 货号 | A01X1063 |
温度 | 液氮 | 细胞形态 | 单核细胞、巨噬细胞样 |
英文名称 | J774A.1:J774A1 | 生长特性 | 贴壁细胞，不用胰酶消化 |
细胞详情：
J774A.1小鼠单核巨噬细胞生长特性 贴壁细胞，不用yi酶消化
细胞形态 单核细胞、巨噬细胞样
生长培养基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S
冻存条件
冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
注意事项 1、该细胞不建议使用yi酶消化，yi酶会刺激分化； 2、 超过3天不传代细胞容易分化； 3、 培养时，存在少量分化细胞，属于正常现象。
背景描述 J774A.1细胞来源于BABL/cN小鼠，有抗体依赖的吞噬作用，生长受硫酸葡聚糖、PPD和LPS的抑制；J774A.1细胞可产生IL-1β和大量的溶jun酶。
年龄（性别） 成年
组织来源 巨噬细胞
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 肉瘤细胞
生物安全等级 1
倍增时间 ~17 hours
受体表达情况 Complement (C3), expressed;Fc receptor, IgG, high affinity I (Fcgr1), expressed
保藏机构 ATCC; TIB-67 DSMZ; ACC-170 ECACC; 91051511
细胞系操作步骤：
(1) 细胞系培养：取6cm细胞皿，向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液，37℃ CO2培养密度至40%~60%，密度过大，转染后不利筛选细胞。
(2) 转染液制备：在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)
A液：用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。
B液：用不含血清培养基稀释2ul脂质体。
分别将A液与B液轻弹混匀，静置5分钟。
(3) 吸取B液加入至A液中，轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
(4) 转染准备：用1mL不含血清培养液漂洗两次，再加入4mL不含血清培养液。
(5) 转染：把A/B复合物缓缓加入培养液中，摇匀，37℃温箱置6~24小时，吸除无血清转染液，换入正常培养液继续培养。
(6) 瞬时转染后，可在48h-72h细胞长满之后，提取细胞蛋白或者RNA，验证敲减/过表达效率。
细胞处理：
1） 冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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