供货周期: | 现货 |
品牌: | 抚生 |
规格: | 1×106 |
货号: | A01X1178 |
CAS号: |
商品属性:
产品名称 | MDBK牛肾细胞 | 鉴定 | STR鉴定 |
种属 | 牛 | 货号 | A01X1178 |
温度 | 液氮 | 细胞形态 | 上皮细胞样 |
英文名称 | MDBK:MDBK | 生长特性 | 贴壁生长 |
细胞详情:
MDBK牛肾细胞细胞别称:MDBK (NBL-1); NBL-1; Madin-Darby Bovine Kidney; Madin Darby Bovine Kidney
种属来源:牛
年龄性别:雄;成年
组织来源:肾;正常细胞
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
背景简介:MDBK(NBL-1)细胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1957年2月18日从一只表观正常的成年牛肾脏建立的。1973年,这株MDBK(NBL-1)细胞被牛病毒性痢疾病毒(BVDV)感染;1982年,发现了一株未被BVDV感染的MDBK(NBL-1)细胞株,此细胞最初来自ATCC1967年7月第96代的冻存管。MDBK(NBL-1)细胞的后代经NVSL检测,未发现被任何病毒污染的证据。1982年8月,R·A·Van Deusen将MDBK(NBL-1)提供给ATCC时,已传代至第110代;MDBK(NBL-1)细胞未被BVDV感染。
生物安全等级:2
细胞规格:1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测:无
基因表达情况:keratin
保藏机构:ATCC; CCL-22 ATCC; CRL-6071DSMZ; ACC-174 ECACC; 90050801
培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
细胞系操作步骤:
(1) 细胞系培养:取6cm细胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105个细胞培养液,37℃ CO2培养密度至40%~60%,密度过大,转染后不利筛选细胞。
(2) 转染液制备:在EP管中制备以下两液(为转染每一个孔细胞所用的量)
A液:用不含血清培养基稀释1ug 质粒DNA。
B液:用不含血清培养基稀释2ul脂质体。
分别将A液与B液轻弹混匀,静置5分钟。
(3) 吸取B液加入至A液中,轻弹混匀。室温中置10-15分钟。
(4) 转染准备:用1mL不含血清培养液漂洗两次,再加入4mL不含血清培养液。
(5) 转染:把A/B复合物缓缓加入培养液中,摇匀,37℃温箱置6~24小时,吸除无血清转染液,换入正常培养液继续培养。
(6) 瞬时转染后,可在48h-72h细胞长满之后,提取细胞蛋白或者RNA,验证敲减/过表达效率。
细胞处理:
1) 冻存细胞的复苏:
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
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